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硝化细菌的分离、培养和观察



录入时间:2011-8-30 9:23:58 来源:百度

硝化细菌是生物界中一类特殊的生产者,能进行硝化作用参与氮素的转化
 
仪器与试剂:
恒温箱、高压灭菌锅、天平、量杯、玻棒、大试管、三角瓶(250毫升)、显微镜、白瓷板、α—萘胺试剂、二苯胺试剂、醋酸、磺胺酸,革兰氏试剂、PH试纸、(NH4)2SO4、NaH2PO4、K2HPO4、Na2CO3、MnSO4•4H2O、MgSO4•7H2O、NaNO2、NaOH(0.1N)、HCl(0.1N)、浓H2SO4、蒸馏水。
 
实验过程:
(一)   配制硝化细菌培养液:
NaNO2
1g
MgSO4·7H2O
0.03g
MnSO4·4H2O
0.01g
K2HPO4
0.75g
Na2CO3
1g
NaH2PO4
0.25g
     蒸馏水
     1000ml
培养液pH值用0.1NNaOH或0.1NH4Cl调至7.0~7.2。
 
(二)灭菌
将配制好的培养液分装在大试管中,每管约15毫升,堵上包有纱布的棉塞,放在高压灭菌锅中,15磅30分钟灭菌备用。
 
(三)样品采集:
采用公园下层湖水约100毫升即可。
 
(四)接种:
用吸管吸取样品,每支试管接1~2毫升样品。
 
(五)培养:
置于28~30℃恒温箱中静置7~10天。
 
(六)结果测定:
 
1、配制试剂:
(1)α—萘胺试剂的配制:用天平称取α—萘胺5克于100毫升醋酸(5N)中,用玻棒搅拌溶解。
(2)二苯胺试剂的配制:用天平称取0.5克二苯胺溶于100毫升浓浓H2SO4中,再加入20毫升蒸馏水中搅拌稀释。
 
2、NO2-的检验:
在瓷盘小孔内各加入1滴α-萘胺试剂,然后加少许试验液,变红色的为(+),未变色(黄色)的为(-)。
 
3、NO3-的检验:
(1)先除去培养物中的NO2-:方法是在培养物中加入醋酸5~8滴,使之酸化,再加入数粒磺胺酸,当停止放出气体时,再加入一粒磺胺酸,此过程中NO2-转化为N2而逸出。用α-萘胺试剂检查,如不出现红色,证明培养物中不含NO2-。
(2)检验NO3-的产生:方法是吸取培养物少许于白瓷板凹窝中,滴入二苯胺试剂,如有蓝色出现,即证明有NO3-的积累。
 
(七)富集培养:
将测定为(+)的菌液接入装有100毫升培养液的250毫升三角瓶中(培养液已灭过菌),置28~30℃恒温箱中培养,待生长后测定结果为(+)再接另瓶培养液中进行培养。如此经多次移接,可使培养液的亚硝化细菌和硝化细菌逐步增多。
 
(八)观察:
将菌液制成涂片,经革兰氏染色后,显微镜下观察菌体形态。

 

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