食源性致病菌检测技术（8）

  肉毒杆菌

    肉毒杆菌为肉毒中毒的病原菌，是常见的食物中毒菌之一。肉毒梭菌按抗原性不同，可分A、B、C、D、E、F、G7种血清型，对人致病者以A、B和E型为主，F型较少见，C、D型主要见于禽畜感染。各型均能产生外毒素。进食含有肉毒梭菌外毒素的食物可引起食源性疾病。如不及时治疗，死亡率可高达70%。 

1.常规分离的鉴定技术

    细菌分离培养：见GB/4789.12-2003。

    肉毒毒素检测：肉毒毒素检测以小白鼠腹腔注射法为标准方法。 

2.流行病学分型技术

    小白鼠腹腔试验:取早期血清规戒律注入小白鼠腹腔(或豚鼠、小猫) 腹腔，每鼠1毫升，对照组分别加用A、B、E、F型抗毒素，如有肉毒毒素，则小白鼠出现呼吸困难及蜂腰（腰部凹下如蜜蜂）和失声，但加用同型抗毒素者无症状。 

    禽类眼睑注射法：将标本液0.1-0.5毫升注射于鸡、麻雀或鸽子等一侧下眼睑皮下，另侧注射稀释用液作对照。如眼睑闭合，可判定标本中含有肉毒毒素。根据标本中毒素量不同，检出时间从十几分钟到48h不等。如将不同型别的抗毒素分别加入标本液，则可借以判定毒素的型别。 

    间接血凝试验：用各型肉素抗毒素致敏的红细胞来检查可疑食物浸出液中有无毒素与毒素的型别。该方法特异性及敏感度都很高。 

    脉冲场凝胶电泳分型：使用两种限制性酶（SmaI—XmaI and XhoI）的PFGE方法，对从芬兰新鲜鱼和鱼类产品中分离的67株、德国农场中的鱼分离到的15株和从北美等地分离到的10株肉毒梭菌E型菌进行分析。PFGE和RAPD联合分析使得92株E型菌分为62个亚型。E型分离株是的观察到的高度生物多样性表明以DNA片段为基础的分型方法在食品工业污染研究中和肉毒中毒暴发研究虽有价值的。

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