中文版  |   English  |   加入收藏  |   客服热线:400-0532-596
微生物技术资料
文章检索
  首页 > 微生物知识->细菌基本知识和检测方法->质粒DNA提取及琼脂糖凝胶电泳检测(下)

质粒DNA提取及琼脂糖凝胶电泳检测(下)



录入时间:2011-9-9 16:24:50 来源:生物在线

二、琼脂糖凝胶电泳

琼脂糖凝胶电泳技术(Agarosegelelectroghoresis)是分离、鉴定和提纯DNA片断的有效方法。凝胶分辨率决定于使用材料的浓度,并由此决定凝胶的孔径。琼脂糖凝胶可分辩0.1~6.0kb的双链DNA片段。琼脂糖凝胶电泳是一个电场作用。它首先利用琼脂糖的分子筛效应,此外,在弱碱性条件下,DNA分子带负电荷,从负极向正极移动。根据DNA分子大小、结构及所带电荷的不同,它们以不同的速率通过介质运动而相互分离。借助溴化乙锭(EB)能与双链DNA结合的作用,利用EB染色,并通过紫外线激发即可观察被分离DNA片段的位置。

【材料】
      1、琼脂糖、10×TAE电泳缓冲液(40mMTris,20mMNaAc,1mMEDTA,PH8.0)
      2、载体缓冲液(0.25%溴酚蓝,30%甘油)、溴化乙锭水溶液(10mg/ml)
      3、凝胶槽、电泳仪

【方法】

1、取琼脂糖0.9g,加入100ml1xTAE电泳缓冲液于250ml烧瓶中,100℃加热溶解。

2、平衡凝胶槽,放好两侧挡板,调节好梳子与底板的距离(一般高出底板0.5~1mm)。

3、铺板:在溶解好的凝胶中加入终浓度为0.5ug/ml的溴化乙锭水溶液,轻轻混匀,待冷至500C左右倒入凝胶槽,胶厚一般为5~8mm。

4、待胶彻底凝固后,去掉两侧挡板,将凝胶放入盛有电泳液的槽中(加样孔朝向负极端,DNA由负极向正极移动),使液面高出凝胶2~3mm,小心拔出梳子。

5、DNA样品与载体缓冲液5:1混合并加入凹孔中(样品不可溢出)。

6、打开电源,调节所需电压,电压与凝胶的长度有关,一般使用电压不超过5v/cm。

7、据指示染料移动的位置,确定电泳是否终止(溴酚蓝的涌动距离在5sRNA和0.3kbDNA带之间)。

8、电泳完毕关闭电源。将凝胶放紫外灯下观察并拍照。

 

上一篇:质粒DNA提取及琼脂糖凝胶电泳检测(上)

下一篇:几种海藻及海洋细菌的DNA制备方法

相关文章:
柯斯质粒 质粒载体
生长速率引起的质粒不稳定 引起基因工程菌质粒不稳定的原因
提高基因工程菌的质粒稳定性 质粒设计对目的基因表达的影响
质粒的概念及分类 小肠结肠炎耶尔森氏菌VW抗原与毒性质粒
大肠杆菌质粒DNA的提取(碱裂解法) 质粒DNA提取及琼脂糖凝胶电泳检测(上)
首页 | 关于我们 | 网上商城 | 在线客服 | 联系我们
业务联系电话
   400-0532-596 0532-66087773
   0532-66087762 0532-81935169
邮箱:qdhbywg@vip.126.com
地址:青岛市城阳区锦汇路1号A2栋
产品技术咨询
  工作日(周一至周六8:00-18:00):
  18562658263 13176865511
  其它时段:13105190021
投诉与建议:13105190021 13006536294