酸奶中嗜热链球菌的分离及鉴定（1）

1.  材料与方法

1.1分离培养基

BCG牛乳培养基 ：

 ( A) 溶液： 脱脂乳粉2 0 g，水1000mI，加入1.6%溴甲酚紫乙醇溶液0.2mL 80℃灭菌 20min

( B ) 溶液： 酵母膏 2g，水100mI，琼脂 4g，121℃湿热灭菌20min。以无菌操作趁热将( A) ( B ) 溶液混合均匀后倒 8个平板。

乳酸菌葡萄糖发酵培养基 蛋白胨0.5g，牛肉膏0.5g，酵母膏0.5g， 吐温 8 0 0.05ml，葡萄糖1g， 蒸馏水100ml， 加入1.6%溴甲酚紫溶液约0.14ml。以上成分溶解后调pH到 6.8 ～7.0分装到10只试管中。每只试管里再放置一支德拉姆氏小管。105℃湿热灭菌 15min。

 牛乳培养基 12g全脂奶粉，加水100mL加入10g 葡萄糖，溶解后分装，105℃灭菌15min， 取出备用。 

1.2实验方法

嗜热链球菌分离与纯化  将新鲜酸奶采用稀释平板涂布法进行平板涂布分离。挑取培养基上的黄色菌落( 菌落周围培养基变为黄色)，采用划线法进行分离纯化，获得纯菌种。

菌种的革兰氏染色和形态观察  将分离的纯菌种接种在BCG牛乳培养基上，40℃培养28h，用无菌接种环取一环菌均匀涂布在滴有无菌水的载玻片上，自然风干。固定后进行革兰氏染色。染色后用显微镜油镜进行观察。

发酵产物鉴定——纸层析法  将分离的纯菌种接种到乳酸菌葡萄糖发酵培养基上， 40℃培养48h。取产酸不产气的液体试管中发酵液做纸层析。展开剂：水30mL、 苯甲醇150mL、 正丁醇150mL、甲酸3.3mL。 显色剂 ： 将1.6%的溴酚蓝酒精溶液用0.1 mol／L的 NaOH 调pH到6.7。显色后，分别测定发酵液与2%标准乳酸的Rf值，确定发酵产物中是否有乳酸。

牛奶发酵实验 将分离的纯菌种活化后，以2%的接种量接入牛乳培养基中，摇匀后，将瓶盖拧紧密封。将三角瓶置于40℃恒温箱中培养，出现凝固后转入4℃冰箱中冷藏24h。

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