组织培养中污染及防止（下）

四、针对污染源常使用的防治方法

A. 种类

1. 热疗－对病毒较有效但须花费时间。处理时，需6-12星期在30-40℃。

2. 冷疗法－亦对病毒有效。

3. 利用抗生素。

4. 以分生组织，不带病毒等污染源。

5. 利用培养基中高糖，高盐的浓度。

6. 利用抗并毒药物。

7. 营养需求不同。

8. 利用水。

9. 抽样检测。

B. 防治方法之效果讨论

1. 热疗法及冷疗法

对病毒有效，但须花时间处理，例如：热疗法处理时间需花6-12星期在30-40℃。

2. 利用抗生素

这是目前较常用的方法，但是在抗生素加入培养基，其有效浓度常因植物具有半渗透功能，而使浓度无法达到有效浓度。使用抗生素时，需注意下列事项：

（1）要知道抑制的微生物为何，再使用抗生素，及对症下药。

（2）要决定最小抑制浓度，以降低成本。

（3）要确定抗生素不会对植物造成并害或突变。

（4）确定抗生素在培养基上是否有作用。

（5）使用时，常因需要而多种混合或交替使用。

（6）有些抗生素在某些国家是禁止使用，使用前必须做询问此药剂是否合法使用。

使用抗生素的缺点

（1）可能对哺乳类动物有害。

（2）若是使用生长期较长的植物，微生物亦有抗药性产生。

（3）容易错误使用：没有针对微生物而使用各种不同的抗生素。

抗生素的种类 对象

抑制细胞壁合成

Bactracin G(+)，杀菌，对抗β-lactams的菌有作用

β-lactams G(+)，杀菌，若用10-100倍，则对G(-)有效

Glycopeptides G(+)，杀菌，但恨贵，不易有抗药性

抑制膜的形成

plymixins 对G(-)Psedomonas spp.有效

抑制蛋白质的合成

Ghloramphrnical 杀菌作用，便宜，但对植物有毒害作用

Aminoglycosides 使用对象广泛，对植物有毒害作用，在碱性环境下较有活性可针对G(-)可和盘尼西林(pencillins)一起作用

Macrolides and 对G(+)有静菌作用

Lincosamides

Tetracyclines 为静菌作用，对G(+)、G(-)都可以会刺激酵母菌，植物有害对

核酸抑制物质

Qutnolnes 杀菌，对 G(+)有效，10-100倍浓度则对G(-)有效，有抗药性产生，可引起过敏反应易

Rifampicin 杀菌，对一些G(+)或G(-)的细菌有作用，但常有抗药性产生

Trimethoprim 对于一些 G(+)或G(-)的细菌有作用，Trimethoprim

Sulphonamides Sulphonamides两种混合使用有加强的作用

Sulphonamides在碱性环境下较活跃

3. 分生组织法

主要是针对在植物内部寄主的菌类，如病毒等。因其生长速度无法长到顶芽的分生组织，所以在顶芽的分生组织则无病原菌存在。可以利用此分生组织培养成植株即可避免感染问题。

4. 利用培养基中高盐或高糖的浓度

在培养基中有一些高盐或高糖的浓度可抑制微生物生长，或有单宁酸的存在时也可以达到抑制效果。

5. 利用抗病毒药物

Ribaririn－对于ssRNA病菌有抑制作用，但是价格昂贵。

6. 营养需求不同

因为不同的菌类其营养需求不同，因此可利用选择性培养基可筛选或抑制一些微生物。

7. 利用水淹

利用水将植株清洗或是完全浸没，以避免其上的接种源四处扩散。

8. 抽样检测

对于后代植株的抽样检测，可将污染严重的个体去除。以上这些方法可以综合使用，以建立一个清洁的植株。

五、污染所造成的结果

1. 生产成本的提高。

2. 对植株造成伤害。

3. 增加接种源及污染的机率。

六、在组织培养过程各个阶段所应注意事项

（1）目前组织培养之流程主要分两种，如下图所示：

在此两种系统中，ModelⅠ和ModelⅡ之比较：

ModelⅠ：先做好一小批产品，再进入量产，此每一单位为一瓶，且自为独立环境，具区隔性，故有污染时所造成的伤害不大。

ModelⅡ：其为大容器系统，一旦有污染，则整批无法避免将会受到污染其培养基多为液体状态。

（2） 各阶段注意事项

stage0： 建立干净的植株，以利下面阶段的作业进行。只要建立无菌的植株，则污染的来源便只是来自技术上的失误。因此在此阶段要将病株丢除，并且将其具较多污染源的植株去掉。一般会选择较成熟的植株，因其病征易显现找到植株后。分离其菌或病原菌，做系列稀释以决定浓度。

stageⅠ：在stageⅠ的污染可蔓延培养基，故可利用“视觉”将之选出或丢弃，对于潜伏性或是表现微弱的菌种，需作特别的测试，在此阶段，要对一般的微生物作测试及对已知的病原菌作测试，若两种为负便可进入stageⅡ。stageⅡ要把污染的植株去掉，知道病原菌并重复分生组织的培养。

stageⅡ：在此阶段中，只有无菌的植株可繁殖。假设此植株为无菌，则污染源便来自操作室，故要先丢掉污染后，然后再取样抽检。

stageⅢ：如同stageⅡ。

stageⅣ：对后代植株需取样检查。

附：组织培养中污染及防止（上）-点击查看

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