白斑酊等3种制剂微生物限度检查法方法验证

【摘要】  　　目的建立白斑酊等3种制剂的微生物限度检查方法。方法采用5种阳性菌回收率实验测定其是否含抑菌成分。结果根据回收率试验结果，白斑酊、首乌合剂2种供试品试验菌的回收率试验均高于70%，提示无抑菌现象；皮炎洗剂有抑菌作用，但可通过稀释法消除抑菌作用。结论白斑酊、首乌合剂可按常规方法进行微生物限度检查；而皮炎洗剂应用培养基稀释法进行微生物限度检查。

【关键词】  白斑酊； 首乌合剂；皮炎洗剂； 微生物限度检查

　　Abstract：ObjectiveTo establish the microbial limit tests of three preparations such as Baiban tincture. MethodsThe determination of the recovery of five positive microorganisms was used to assay whether there are antibacterial components in three preparations. ResultsThe results, which the recoveries of the tested microorganisms were more than 70%, showed no antibacterial activity in Baiban tincture and Shouwu mixture，meanwhile Dermatitis lotion had antibacterial activity which could be eliminated by media dilution method. ConclusionThe conventional method of the microbial limit tests may be used for Baiban tincture and Shouwu mixture, while media dilution method is used for Dermatitis lotion. 

　　Key words：Baiban tincture；  Shouwu misture;  Dermatitis lotion；  Microbial limit test
   
　　按2005版《中国药典》要求［1］，对制剂所采用的微生物限度检测方法需进行验证实验，以保证测定方法的可靠性。根据《中国药典》要求，笔者对白斑酊、首乌合剂、皮炎洗剂的微生物限度检查法进行方法验证，为规范医院制剂的微生物检查，提供实验依据。

　　1  器材

　　1.1 供试品

　　白斑酊（江苏省中医院制剂室，批号060322）、首乌合剂（江苏省中医院制剂室，批号060103）、皮炎洗剂 （江苏省中医院，批号051202）。

　　1.2 菌株 

　　金黄色葡萄球菌CMCC〔CMCC（B）26003〕、大肠埃希菌CMCC〔CMCC（B）44102〕、枯草杆菌CMCC〔CMCC（B）63501〕、白色念珠菌CMCC〔CMCC（F）98001〕和黑曲霉菌CMCC〔CMCC（F）98003〕购自南京市药检所。

　　1.3 仪器 

　　手提压力锅（上海三申医疗器件有限公司）；恒温培养箱（余姚县恒温箱厂）；电热恒温培养箱（南京实验仪器厂）。

　　2  方法与结果

　　2.1  菌液制备 

　　取经37℃培养18～24 h的金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、枯草杆菌肉汤培养物1 ml加入9 ml无菌生理盐水作10倍稀释，稀释至10-5～10-7，细菌数约为50～100 cfu/ml，备用。接种白色念珠菌的新鲜培养物置改良马丁培养基中，23～28℃培养24～48 h，后用0.9%灭菌生理盐水稀释制成50～100 cfu/ml，备用。取经20～25℃培养1周的黑曲霉斜面培养物，加水3～5 ml，洗下霉菌孢子，用带有棉花的球形吸管取出菌液，用标准比浊管比浊后，用无菌生理盐水稀释为50～100 cfu/ml，备用。

    2.2 供试液的制备 

　　样品10 ml，加入90 ml pH7.0的氯化钠蛋白胨缓冲液，制成1∶10的供试液备用。

　　2.3  培养基稀释法  采用0.5，0.4，0.3，0.2，0.1 ml/皿的供试液，加15～20 ml琼脂培养基做细菌记数，测定回收率。

　　2.4  回收率测定试验组：取上述供试液加入菌液（50～100 cfu/ml试验菌），立即倾注琼脂培养基，平行制备两个平皿，按《中国药典》2005版培养及菌落记数方法测定其菌落数。菌液组：测定加入的试验菌数。供试品对照组：取规定量供试品，按菌落记数法测定供试品本底菌数。供试品组：考察供试品制备过程中微生物影响的程度。实际收入验时，加入上述5种试验菌株，使最终菌液浓度为50～100 cfu/ml。

　　2.5  结果

　　2.5.1  常规法测定3种制剂的回收率用常规法测定3种制剂回收率试验（见表1及表2），白斑酊、首乌合剂2种供试品试验菌的回收率均高于70%，证明无抑菌现象。皮炎洗剂对大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草杆菌、白色念珠菌的回收率低于70%。表1  3种制剂常规法验证试验回收率（略）表2  3种制剂常规法验证实验回收率（略）

　　2.5.2  培养基稀释法培养基稀释法测定皮炎洗剂的微生物限度的验证实验（见表3），结果回收率达70%以上（0.2ml/皿供试品）。表3  培养基稀释法测定皮炎洗剂的微生物限度实验（略）

　　3  讨论

    本次实验证明白斑酊、首乌合剂对5种阳性对照菌的常规法的回收率均高于70%，因此常规法可用于上述2种制剂的微生物限度检查，皮炎洗剂由于含有抑菌成分，须采用培养基稀释法（0.2 ml/皿）进行微生物限度检查。

    医院制剂由于其形成的特殊性，一般成分较复杂，许多成分都有不同程度的抑菌作用，通过验证来确立各制剂的微生物检验方法是十分必要的。

【参考文献】
  　　［1］国家药典委员会. 中国药典，Ⅰ部［S］. 北京：化学工业出版社，2005：附录71.

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