λ噬菌体的大规模培养：低倍数感染

1、缓冲液和溶液：

SM

氯仿

2、培养基：

NZCYM

3、载体和菌株：

高滴度的λ噬菌体原种

4、离心机和转子：

Sorvall  SS-34或相当型号

5、专用设备：略

二、方法：

1、  接种大肠杆菌适宜菌株的单菌落至分装在500ml锥形瓶的100mlNZCYM中，37℃剧烈振荡培养过夜。

2、  测定培养物的OD600值，以1OD600=1×109个细胞/ml计算细胞浓度.

3、  取4份样品，每份含1010个细胞，4000g（5800r/min 于Sorvall  SS-34）室温离心10min，去上清。

4、  将每份细菌沉淀用3ml SM悬浮。

5、  加入适当数量的感染性噬菌体颗粒，振荡使噬菌体充分分散于整个培养物中。

6、  将感染培养物37℃温育20min，间或摇晃。

7、  将每份感染样品加入到预热至37℃的500ml NZCYM（于2L 烧瓶中），37℃剧烈振荡培养（300r/min）.

8、  8h后开始监视培养物的裂解情况。伴随着细菌和噬菌体的生长，8-12h后裂解发生，如果观察大裂解发生，转入步骤10.

9、  假如12h后裂解不明显，取小量培养物样品，检查噬菌体的生长情况。

a．  取两份感染培养物样品（每份1ml）至玻璃试管中。

b．  每管中加入1至2滴氯仿（约50-100ml），37℃培养5-10min，间或摇晃。

c．  将每管置光线下比较培养物的外观。如果接近完全感染但细胞还没有裂解，氯仿将导致细胞破裂，从而使混浊的培养物变为透明。在这种情况下，转入步骤10.

10、每个烧瓶中加入10ml氯仿，37℃继续振荡培养10min。

11、将培养物冷却至室温，随之用方案6所述沉淀噬菌体颗粒。