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液体染色培养基用于白色假丝酵母菌的鉴定



录入时间:2011-9-27 15:08:32 来源:维普资讯

      芽管试验是鉴定白色假丝酵母菌的关键试验,传统的芽管检测的试剂多为动物血清。我们研制了一种液体染色培养基,用来检测白色假丝酵母菌的芽管和厚膜孢子,临床应用效果良好,报道如下。

关键词: 液体染色培养基; 白色假丝酵母茵; 芽管; 厚膜孢子  

1 材料

1. 1  菌株来源  白色假丝酵母菌ATCC 14053ATCC90028ATCC 64550ATCC 645 48,热带假丝酵母菌ATCC750,克柔假丝酵母菌ATCC 6258,光滑假丝酵母菌ATCC 2238N L,近平滑假丝酵母茵ATCC 22019均由广州乐通泰公司提供。由甘肃省临床检验中心自门诊和住院患者的痰液、尿液、粪便、分泌物等中分离的假丝酵母菌共146株,其中白色假丝酵母菌132株,热带假丝酵母菌 10株,克柔假丝酵母菌2株,光滑假丝酵母菌2株,均经 API-20CAUX卡鉴定证实。    

12 液体染色培养基主要试剂 葡萄糖、吐温- 80、尿素等购自上海化工试剂厂,蛋白胨购自广州乐通泰公司。

13 正常人血清 医院检验科生化室提供。  

2 方法   

21  菌液准备  将各种假丝酵母菌标准菌株及临床分离株分别接种沙保弱琼脂,35培养48h,挑取菌落,混匀2ml无菌蒸馏水中,在浊度仪上调整菌液浓度为4个麦氏单位 (8×108m1) 

22 液体染色培养基配制 选择适合假丝酵母菌生长繁殖的液体沙保弱培养基(100ml 蒸馏水中含葡萄糖5g,蛋白胨10g ) 作基础1, 在其中添加( NH4) 2 SO4  005gKH2 PO 4 2 g 

MgSO4 005gCaCl2 005g。在上述培养基中添加刺激厚膜孢子形成的吐温- 80 2.0 g,玉米粉10 g,氯霉素005g,调p H606. 8。高压灭菌后,加入经过滤除菌的1moL 尿素003 ml,贮存备用。接种待测菌并培养后,往菌液中滴加l0 gL美蓝05 ml, 使生成的芽管和厚膜孢子着色,便于镜下观察。 

23 液体染色培养基与人血清检测芽管对比试验 在无菌试管中分别加入05ml液体培养基或人血清,每管加入相应菌液100,置35温育60120180min,分别用加样器取菌液 100至载玻片上,高倍镜下计数100个假丝酵母菌所产生的芽管数。 

24 厚膜孢子检测 继续培养2472h后,取菌液于载玻片上,加盖玻片在油镜下观察厚膜孢子。  

3 结 果

31  液体染色培养基与人血清检测白色假丝酵母菌芽管结果见表1 

1  液体染色培养基与人血清检测白色假丝酵母菌芽管比较

 

菌株

液体染色培养基

人血清

0.5h

1h

2h

3h

0.5h

1h

2h

3h

白色假丝酵母菌ATCC14053

5

11

31

47

1

13

15

18

白色假丝酵母菌ATCC90028

3

14

40

63

1

20

46

47

白色假丝酵母菌ATCC64550

5

17

28

30

0

20

22

40

白色假丝酵母菌ATCC64548

2

16

32

40

0

20

22

24

白色假丝酵母菌 临床分离株1

3

18

30

40

0

23

65

69

白色假丝酵母菌 临床分离株2

2

24

30

68

0

19

22

23

白色假丝酵母菌 临床分离株3

3

19

38

66

1

27

40

50

白色假丝酵母菌 临床分离株4

4

16

24

56

0

14

29

32

芽管发生率(%)

3.4

28.1

35.3

45.9

0.4

19.5

33.0

36.8

 

32 液体染色培养基测定芽管的特异性3h内,白色假丝酵母菌标准菌株( 4) 和临床分离株( 1 3 2) 均产生芽管,而热带假丝酵母菌、克柔假丝酵母菌及光滑假丝酵母菌标准

菌株和临床分离株均不产生芽管。   

3.3       白色假丝酵母菌在液体染色培养基中形成的芽管及厚膜孢子。  

4 讨论

本文报告的液体染色培养基适合各种假丝酵母菌生长尤其在温育30min后即可观察到芽管的形成,适合白色假丝酵母菌快速检验。继续培养2472h,还可观察到白色假丝酵母菌形成厚膜孢子。热带假丝酵母菌、克柔假丝酵母菌光滑假丝酵母菌等在该培养基上3h内不产生芽管,因此该培养基特异性较强。与传统的动物血清法对比,在该培养基中芽管形成较快, 培养基成分为实验室常用的化学试剂,来源、配制均较方便,无病原体存在,比常用的人血清安全,适合基层实验室快速鉴定白色假丝酵母菌。能否利用该培养基对其他假丝酵母菌菌如热带假丝酵母菌、克柔假丝酵母菌等进行辅助鉴定如观察假菌丝形态、尿素分解试验等正在研究中。新鲜配制的培养基效果较好,高压除菌后可用半年。 

作者:魏莲花,张俭,邹凤梅,刘刚(甘肃省临床检验中心,兰州730000)  

参考文献: 

[1]章强强,Vidotto VAceattatis G,等.葡萄糖对白色念珠菌芽管形成的影响[J].中国皮肤性病杂志,199812 (3)140141    

 

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