液体染色培养基用于白色假丝酵母菌的鉴定

关键词： 液体染色培养基； 白色假丝酵母茵； 芽管； 厚膜孢子  

1 材料

1. 1  菌株来源  白色假丝酵母菌ATCC 14053、ATCC90028、ATCC 64550、ATCC 645 48，热带假丝酵母菌ATCC750，克柔假丝酵母菌ATCC 6258，光滑假丝酵母菌ATCC 2238N L，近平滑假丝酵母茵ATCC 22019均由广州乐通泰公司提供。由甘肃省临床检验中心自门诊和住院患者的痰液、尿液、粪便、分泌物等中分离的假丝酵母菌共146株，其中白色假丝酵母菌132株，热带假丝酵母菌 10株，克柔假丝酵母菌2株，光滑假丝酵母菌2株，均经 API-20CAUX卡鉴定证实。    

1．2 液体染色培养基主要试剂 葡萄糖、吐温- 80、尿素等购自上海化工试剂厂，蛋白胨购自广州乐通泰公司。

1．3 正常人血清 医院检验科生化室提供。  

2 方法   

2．1  菌液准备  将各种假丝酵母菌标准菌株及临床分离株分别接种沙保弱琼脂，35℃培养48h，挑取菌落，混匀2ml无菌蒸馏水中，在浊度仪上调整菌液浓度为4个麦氏单位 (约8×10⁸／m1)。 

2．2 液体染色培养基配制 选择适合假丝酵母菌生长繁殖的液体沙保弱培养基(100ml 蒸馏水中含葡萄糖5g，蛋白胨10g ) 作基础^［1］， 在其中添加( NH₄) ₂ SO₄  0．05g，KH₂ PO ₄ 2 g， 

MgSO₄ 0．05g，CaCl₂ 0．05g。在上述培养基中添加刺激厚膜孢子形成的吐温- 80 2.0 g，玉米粉1．0 g，氯霉素0．05g，调p H为6．0～6. 8。高压灭菌后，加入经过滤除菌的1mo／L 尿素0．03 ml，贮存备用。接种待测菌并培养后，往菌液中滴加l0 g／L美蓝0．5 ml， 使生成的芽管和厚膜孢子着色，便于镜下观察。 

2．3 液体染色培养基与人血清检测芽管对比试验 在无菌试管中分别加入0．5ml液体培养基或人血清，每管加入相应菌液100，置35℃温育60、120、180min，分别用加样器取菌液 100至载玻片上，高倍镜下计数100个假丝酵母菌所产生的芽管数。 

2．4 厚膜孢子检测 继续培养24～72h后，取菌液于载玻片上，加盖玻片在油镜下观察厚膜孢子。  

3 结 果

3．1  液体染色培养基与人血清检测白色假丝酵母菌芽管结果见表1。 

表1  液体染色培养基与人血清检测白色假丝酵母菌芽管比较

3．2 液体染色培养基测定芽管的特异性3h内，白色假丝酵母菌标准菌株( 4株) 和临床分离株( 1 3 2株) 均产生芽管，而热带假丝酵母菌、克柔假丝酵母菌及光滑假丝酵母菌标准

菌株和临床分离株均不产生芽管。   

3．3       白色假丝酵母菌在液体染色培养基中形成的芽管及厚膜孢子。  

4 讨论

本文报告的液体染色培养基适合各种假丝酵母菌生长尤其在温育30min后即可观察到芽管的形成，适合白色假丝酵母菌快速检验。继续培养24～72h，还可观察到白色假丝酵母菌形成厚膜孢子。热带假丝酵母菌、克柔假丝酵母菌光滑假丝酵母菌等在该培养基上3h内不产生芽管，因此该培养基特异性较强。与传统的动物血清法对比，在该培养基中芽管形成较快， 培养基成分为实验室常用的化学试剂，来源、配制均较方便，无病原体存在，比常用的人血清安全，适合基层实验室快速鉴定白色假丝酵母菌。能否利用该培养基对其他假丝酵母菌菌如热带假丝酵母菌、克柔假丝酵母菌等进行辅助鉴定如观察假菌丝形态、尿素分解试验等正在研究中。新鲜配制的培养基效果较好，高压除菌后可用半年。 

作者：魏莲花，张俭，邹凤梅，刘刚(甘肃省临床检验中心，兰州730000)  

参考文献： 

[1]章强强，Vidotto V，Aceattatis G，等．葡萄糖对白色念珠菌芽管形成的影响[J]．中国皮肤性病杂志，1998，12 (3)：140．141．    

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