L型细菌及其感染（上）

　　L型细菌（L菌）早就发现了，只是直到近20多年来由于检验技术不断地改善，才对L菌及其感染有了较为深入的认识，有关的报道才越来越多，其所致的病种范围也在不断地扩大。据国内拟诊败血症的万余例一般培养的结果，有细菌生长者仅占17.8%～18.4%，即使诊断为菌血症者，细菌培养阳性者也仅占42％，脓汁培养阴性者达到27.3％，普通培养阴性者除疑厌氧菌外，就疑L菌；另有材料云，败血症常规血培养阳性率为13.2％，L菌的检出率为36.3％，甚有高至60％～80％；急性风湿热患者有83％从血中培养到L型链球菌；尿道感染尿常规培养细菌检出率为9.9%,L菌占33.9％，后者中大肠杆菌L菌占23.1％，金葡菌L菌占21.4％。于今对L菌的认识已不仅是细菌形态学问题，而是涉及到传染病学、遗传学、病理学、细胞生物学、免疫学及生物制品质控等广泛领域的重要问题［１］。因而作者据手头资料就此题目作一扼要介绍于下。     
                   
　　1  L菌名称的由来

    1935年英国学者Klieneberger在研究鼠咬热的病原体念珠状链杆菌时，意外地发现了一种肉眼可见的微小菌落，其菌体呈高度多型性，认为是该菌的一个变种；因为该变种是在Lister医学研究所内发现的，即取其第一个字母以命名，故称为L菌。Lister是英国著名的微生物学家。L菌也称细菌L型，其可见的英文名称就有5个之多，即L-form、L-phase、L-organism、L-phase variant和Cell wall deficient bacteria，以前者为常见。

　　2  L菌的分布

    此型细菌分布极广，可以说凡有细菌存在之处，如土壤、河水、动物器官及人体组织等，便有L菌的存在；病原微生物的L菌保存着一定的毒力，具有致病性。已经发现一些真菌和螺旋体也会变成L菌。

　　3  L菌的形成

    凡能直接或间接地作用于菌壁，使其产生亚致死性损害的各种因素，均可诱生出L菌。其机制有以下两种：

　　3.1  自发形成 

　　很少见，机制不明；目前所知只有念珠状链杆菌和拟杆菌可自然形成。

　　3.2  诱导产生 

　　抗生素如青霉素类、头孢菌素类、万古霉素、杆菌肽和溶葡萄球菌素等，在长期给药后；酶的作用如溶菌酶和脂酶等；免疫作用如抗体、补体噬菌体和吞噬细胞等；氨基酸如甘氨酸、蛋氨酸和甲硫氨酸等；理化因素如亚硝酸盐、D-环丝氨酸、紫外线、去氧胆酸盐等，均可诱生此型细菌。这些因素导致产生L菌的机制有4种：改变细菌的DNA；破坏细菌的细胞壁；阻断细菌的肽聚糖的合成和机体的免疫干扰［２］。

    G＋球菌以金葡菌为代表说明之。金葡菌的细胞壁的主要成分为黏肽，占胞壁干重的50％～80％。β-内酰胺类抗生素和溶菌酶均可干扰其合成，使菌壁出现缺陷；溶菌酶还能破坏乙酰葡糖胺和乙酰胞壁酸分子间的连接；半合成青霉素的脂溶性强；这些均会破坏菌壁。G-杆菌的细胞壁的主要成分是脂多糖，黏肽含量少，只占菌壁干重的1％～10％，故不受β-内酰胺抗生素的影响，但可被脂酶所损害，进而菌壁便遭破坏。

　　4  L菌的形态与生物学特性

　　4.1  形态学特性 

　　(1)细胞壁缺损：此型细菌虽然胞壁缺如或残缺不全，但是只要其胞浆完整无损，在高渗环境中依然具有生命力，可生长繁殖；(2)基本形态：高度多形性，可表现为球状、杆状、链状及丝状形，且大小不一；菌落微小，直径只1μm左右；在琼脂培养基上，进而细胞壁便遭破坏菌落内陷，与普通的菌落外凸不同；在低倍显微镜下，菌落呈“油煎蛋”样；在高倍镜下，菌落边缘为大形菌，比亲本菌株要大，中心为小形菌。

　　4.2  生物学特性 

　　(1)嗜高渗性：只有在高渗环境中才能生长，在普通的培养基上不生长；由于已经失去了坚固的菌壁，只剩下一层胞浆膜，故在非高渗的环境中，菌体就会迅速地溶解而死亡；如L型金葡菌在蒸馏水中3min就会裂解，2h后消失，在0.1%～0.2％的氯化钠溶液中，15min后，细菌减少90％，而在2%～15％的氯化钠溶液中，菌体则无变化； (2)返祖性：这是一个重要的生物学特性；当抑制、破坏菌壁的因素去除后，L菌又恢复了完整的细胞壁，变回亲本菌株，又有了亲本菌株的特性，这就是返祖性。返祖性又可分为下列两种，即①易变性L菌：当抑制、破坏细胞壁的因素去除后很快回复到亲本菌株的L菌称之；临床分离到的多为此型；通常刚形成的或细胞壁缺陷较轻的L菌较易返祖，细胞壁完全缺如者则不易返祖；②稳定性L菌：当抑制、破坏细胞壁的因素去除后，经过多次传代仍然保持着L菌的特性称之；严格地说，只有这一型的细菌才能称为L菌；(3)弱抗原性：细菌的主要抗原在胞壁及其表面的附属物上，一旦菌壁缺失，就会导致抗原性大为减弱，乃至消失；L菌可长存于宿主的体内，并抗拒宿主的防卫机制；它虽具抗原性，但抗原性薄弱，因此能逃避宿主免疫系统的自卫性攻击；这就是L菌得以长存于宿主体内的原因。

　　5  L菌的培养

    它可分为3种类型，即液体增菌培养基、液体培养基和固体培养基。在普通培养基中可加入渗透压稳定剂20％的人血浆（或马血浆）和5％氯化钠，也有用10％马血浆和3%～5％氯化钠(或12%～15％蔗糖)；固体培养基现多用成品Kagan培养基；国内多用改良培养基。要用特殊的高渗培养剂是因为L菌的胞膜内蛋白质含量高，导致渗透压高于胞膜外，培养时需要有一定的高渗环境才能稳住菌形不变。这也就是L菌常规培养阳性率不高的原因。现在知道L菌也存在于红细胞内，当红细胞裂解时此菌就大量释入于血中，故有学者就把采得的血标本用溶血法把红细胞溶解来培养L菌，结果常规培养检出率为1.4％（3/210份），溶血培养检出率为48.5％（102/210份），检出率明显提高［３］。

　　6  L菌与支原体的实验室区别

    两者极易混淆，必须认真鉴别，其鉴别点如下： L菌的形成是外界因素影响所致，而支原体则是固有形态，在分类学上毫无关系；L菌的菌落较大，为0.5～1.0mm,支原体的菌落则较小，为0.1～0.3mm；L菌有返祖性，支原体则无此特性；保色时间有别，L菌因为菌壁缺陷，致结晶紫易渗入，和支原体一样均可被染成蓝色，但前者的保色时间较长，后者则相反，很快褪色；两者无共同的抗原性，不发生交叉反应；L菌在增殖期不需要胆固醇，而支原体则需要此种物质。

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