病毒鉴定—微量免疫电泳

    把电泳技术与免疫双扩散技术结合起来的方法称为免疫电泳，有不同类型，本试验介绍微量免疫电泳，用于病毒鉴定。

   1.实验材料和用具

    (1)抗血清
    (2)提纯病毒
    (3)0.025M磷酸盐缓冲液(PB)、pH7.0，10％NaN3，1.5％SDS，琼脂糖(电泳用)。

    (4)载玻片、打孔器、开槽刀片、针头、微量加样器、饭盒、电泳仪和水平电泳槽、25℃温箱。

  2.实验步骤

    (1)洗净载玻片，泡在乙醇中，使用前取出擦干备用。
    (2)用缓冲液配制1％琼脂糖液，煮化后加入0.02％NaN3，80℃水浴中备用。

    (3)在微量离心管中将等量的1.5％SDS和提纯病毒混匀，开水浴中煮2-4分钟备用。
    (4)用吸管吸取2ml琼脂糖液，加在载玻片上，注意保持液面水平，分布均匀，厚度为2mm，室温下放置10分钟，移入饭盒保湿，继续放置30分钟使其充分凝固。
    (5)在凝胶上打孔和开槽，并做正负极记号。
    (6)去掉孔内凝胶，在孔中加入SDS处理过的病毒悬浮液，注意不要溢出。
    (7)将玻片放入水平电泳槽，以0.025M   PB   pH7.0为电泳缓冲液，电流量为3-5mA/片，电泳40分钟。
    (8)电泳后取出玻片用针将槽内凝胶去掉。
    (9)在槽内加入血清，饭盒内保湿，25℃下孵育20-40小时观察沉淀线的形成。

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