病原性球菌形态与培养物观察及致病性葡萄球菌的鉴定

病原性球菌主要指葡萄球菌、链球菌、肺炎链球菌、脑膜炎球菌及淋球菌。

这些细菌经常引起人类的化脓性疾病，故又称化脓性球菌。

在临床进行微生物学检查时，根据这些细菌各不相同的形态、染色、培养等特点，即可做出初步诊断。

当难以确定它们的致病性或耐药性时，则需作进一步的实验来鉴定。

一、病原性球菌的形态观察

【材料】葡萄球菌、链球菌、脑膜炎球菌、淋球菌的革兰染色片及肺炎链球菌的荚膜染色片。

【方法】

镜检上述各示教片，注意各菌的形态、排列、染色性以及肺炎球菌的荚膜。

二、病原性球菌的培养物观察

【材料】金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌和腐生葡萄球菌，甲、乙型溶血性链球菌、丙型链球菌、肺炎链球菌在血琼脂平板及脑膜炎球菌在巧克力色血琼脂平板上的24小时培养物。

【方法】

1、观察金黄色、表皮和腐生葡萄球菌在血平板上的生长情况，注意菌落的色素及溶血性。

2、观察甲、乙型溶血性链球菌、丙型链球菌、肺炎链球菌在血平板上的生长情况，注意菌落大小、表面、透明度及溶血性。比较甲链和肺炎链球菌的菌落有无区别。

3、观察脑膜炎球菌在巧克力色血平板上的生长情况，注意菌落表面、透明度。

三、致病性葡萄球菌的鉴定

绝大多数致病性葡萄球菌具有如下特点:

1、产生金黄色色素。

2、对家兔或绵羊红细胞有溶血作用。

3、厌氧条件下分解甘露醇产酸不产气。

4、血浆凝固酶试验阳性。

（一）血浆凝固酶试验（试管法）

血浆凝固酶是致病性葡萄球菌产生的，可使含有肝素或枸椽酸钠抗凝剂的人或兔血浆发生凝固的酶类物质，是判断葡萄球菌致病性的最重要指标。游离凝固酶用试管法检测，结合凝固酶用玻片法测试。

【材料】金黄色及柠檬色葡萄球菌24小时肉汤培养物、无菌肉汤、兔血浆（1:2）、生理盐水、试管、吸管等。

【方法】

1、于三支小试管中各加1:2兔血浆0.5ml。

2、三管分别加金黄色葡萄球菌、柠檬色葡萄球菌和无菌肉汤各0.5ml。

3、将试管置37℃温箱，每半小时观察一次（观察时将试管稍微倾斜）。于3小时内出现凝固者为阳性，一般均于1小时左右凝固。

【结果】

凡血浆呈现胶冻状为阳性，仍呈液状为阴性。

（二）血浆凝固酶试验（玻片法）

【材料】葡萄球菌24小时培养物、兔血浆、生理盐水、玻片等。

【方法】

1、取清洁玻片一张用蜡笔划分成二格，各加生理盐水2接种环。

2、用接种环分别取葡萄球菌菌落少许在盐水中磨匀，使成浓厚而均匀的细菌悬液。

3、于其中一格加兔血浆1接种环，另一格加生理盐水1接种环。

4、1-2分钟后观察结果，如血浆凝固呈颗粒状，而盐水侧仍呈均匀混浊者，表示结果阳性，如二格都无凝固现象出现者为阴性。

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