一、目的
由核蛋白组成的病毒有特有的紫外吸收峰，通过紫外分光光度计使用，掌握其测定原理、操作方法及病毒纯度与定量的方法。
二、主要仪器、用具及药剂
紫外分光光度计、石英比色皿、移液管、吸管、试管、缓冲液、镜头纸。
三、实验材料
TMV或CMV等病毒提纯样品悬浮液。
四、实验步骤
１．准备好提纯品及参比溶液，倒入石英比色杯。
２．打开稳压电源及751分光光度计，将比色杯装入样品槽。
３．按附录操作程序使用紫外光测量样品在波长260nm及280nm处的光吸收值(以A或OD值表示)记录数值。
４．每种病毒的蛋白与核酸含量有固定比例( 附表) ，用本次试验吸收光谱比值(A260/A280)与标准比值比较。
５．用A260值计算病毒的浓度及产量。
病毒浓度(mg/ml)=A260X稀释倍数／E0.1%1cm260nm，
E为消光系数，即在波长260nm时，浓度为0 ·1％(1mg/ml)的悬浮液，光程为1cm时的光(光密度)吸收值。对已知病毒可以从附表中查到；对未知病毒要想定量病毒，先把病毒纯品干燥称重，配成已知浓度的病毒悬液，在260nm下测其光密度，并折算成E0.1% 1cm。
病毒产量(mg/kg)＝浓度X提纯总ml数X1000/组织重(g)
[注意：测量时所用测量杯的宽度应是1cm，若杯宽为0.5cm，则所得光密度值应乘以2] 。由于光散射的影响，所测定的光密度大于病毒实际上的吸收光密度，因而存在误差。因此，准确测定常常对测定的光密度进行校正(见附录)。
附表：几种植物病毒的消光系数(E值)和A260/A280值
病毒种类 E0.1%1cm260nm A260/A280
(TMV) 3 1 1 19
烟草花叶病毒 · ·
(CMV) 5 0 1 65
黄瓜花叶病毒 · ·
(TYMV) 9 6 1 51
芜青黄色花叶病毒 · ·
Y (PVY) 2 8 1 28
马铃薯 病毒 · ·
X (PVX) 2 97 1 19
马铃薯 病毒 · ·
(TNV) 5 6 1 70
烟草坏死病毒 · ·
(TRV) 3 0 1 88
烟草脆裂病毒 · ·
(TEV) 2 4 1 27
烟草蚀纹病毒 · ·
(TRSV) 12 8
烟草环斑病毒 ·
S (PVS) 3 0
马铃薯 病毒 ·
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