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ELISA法检测肺炎衣原体


录入时间:2011-11-16 16:24:07 来源:互联网

肺炎衣原体感染广泛存在于全世界,以隐性感染为主。其临床表现多样,主要引起人非典型肺炎,还可引起咽炎、支气管炎、虹膜炎、肝炎、心内膜炎及结节性红斑等,亦是艾滋病、白血病等疾病继发感染的重要病原,且与冠心病的发生相关,严重威胁人类健康。常见检查方法为ELISA法检测肺炎衣原体抗体。
[检测方法] ELISA法

[方法学原理]


采用ELISA法,血清加到包被纯化的肺炎衣原体抗原的微滴孔中,使之发生反应,然后去除未结合的抗体,加入结合有HRP的抗人Ig抗体使之与已结合的抗体反应,结合的HRP与发色底物发生颜色反应。最后,终止底物反应,在酶标仪上读出光密度值。

[标本准备]

取新鲜末梢血或静脉血。如采血后24h内不能进行试验,分离血清后将其保存于一20℃环境中。检测时,使样本恢复至室温。

[试剂]
1.预包被微孔板
2.阳性对照
3.弱阳性对照
4。阴性对照
5.标本稀释液
6,浓缩酶联物
7,底物A、B
8.终止液

[仪器]
酶标仪或全自动酶联免疫检测仪。

[检测步骤]
1.配制洗涤液 l瓶浓缩洗涤液加475ml蒸馏水。配好的洗涤液短期内可置室温环境中,长期可存于2—8℃环境中。
2.配制酶联物 按1:101倍稀释,即取1u1浓缩酶联物加酶联物稀释液1 000ul(根据检测标本数量确定稀释量),未用完的丢弃。
3.待试剂盒平衡至室温后,待测标本按1;51稀释,即取4tA血清与200u1标本稀释液混合。
4.将稀释标本置37℃环境中20min。
5。各加100ul阳性、弱阳性、阴性对照及已稀释待测标本上清液于相应孔中,空白对照孔加100u1标本稀释液,盖好反应板,置37℃环境中30min。
6。甩尽板中液体,每孔用200~300ul洗涤液洗5次,每次均需拍干。
7.每孔加酶联物100~1,盖好反应板,置37℃环境中30min。
8.甩尽板中液体,洗5次,每次拍干。
9.加底物A、B各1滴或各50tzl,混匀,置37℃环境中15min。
10.取出,加终止液1滴,用酶标仪450nm测其OD值。若肉眼观察则不加终止液,直接判断结果。

[结果判断)
1.阴性对照平均OD值须小于0.20。
2.弱阳性对照平均OD值须在0.20—0.65。
3.弱阳性对照与阴性对照的平均OD值之比须≥2。符合以上3个条件时,本试验结果可信,否则重复实验。
4.若待测标本孔显色比弱阳性对照孔深则判为阳性,反之为阴性。但在弱阳性对照值上下10%范围内最好再测1次,如确实高于弱阳性对照则可判为阳性。

[正常参考值]
肺炎衣原体抗体阴性

[注意事项]
1.本实验结果须结合临床表现、病史作出诊断后,方可采取适当临床处理。
2。试剂盒虽然含有消除干扰因子的物质,但仍可能有少量标本难以除尽干扰。因此,如某标本多项IgM均为阳性,应考虑RF的干扰。

[临床意义]
肺炎衣原体、鹦鹉热衣原体主要引起呼吸系统感染。肺炎衣原体抗体的检测主要用于肺炎衣原体肺炎的辅助诊断和肺炎衣原体感染的流行病学调查。肺炎衣原体抗体在健康成人中的阳性率约25%~50%,而儿童阳性率低于成人。

 

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