粪便标本检验方法

1.涂片检查  粪便标本因各种正常菌群含量甚多，仅以染色性和形态无法分辨是否为病原菌。因此，粪便标本一般不作涂片检查。只有怀疑霍乱弧菌及菌群失调所致腹泻时，才作直接涂片检查(观察动力和菌群比例〉。

2 . 培养

(1)沙门志贺菌培养：①取脓血、黏液样粪便或肛拭子，直接划线接种于强选择性培养基(SS 或H-E、木糖赖氨酸去氧胆酸钠琼脂)和弱选择性培养基(麦康凯、EMB、中国蓝琼脂平板)各1 只。②用接种针挑选SS和麦康凯琼脂平板上不发酵乳糖的无色、透明或半透明、中心黑色的菌落2 个以上，分别接种于三糖铁琼脂(TSI)和尿素-动力-吲哚培养基(UMI) 。③如TSI 和UMI 上生化反应符合沙门菌特征，用沙门菌A~F 多价"O"血清或因子血清进行鉴定；如符合志贺菌属特征，用志贺多价及5 种志贺菌因子血清作玻片凝集，一般可作初步诊断。最后鉴定必须进一步作全面生化反应证实。

(2) 致病性大肠埃希菌培养：引起腹泻的大肠埃希菌有5 种类型，即肠毒素型大肠埃希菌(ETEC) 、肠侵袭型大肠埃希菌(EIEC)、肠致病型大肠埃希菌(EPEC) 、肠出血型大肠埃希菌(EHEC)和肠凝聚型大肠埃希菌( EAggEC) 。取脓液、液状或糊状粪便或肛拭接种于麦康凯(或EMB、中国蓝)琼脂平板， 35℃培养18~24 h ，挑选可疑菌落5个，移种于TSI 和UMI 上， 35 ℃ 过夜后。符合大肠埃希菌的生化反应者，进一步作ETEC 、EPEC 、EIEC 、EHEC 和EAggEC 的鉴定。分型方法参阅有关参考书。

(3) 霍乱弧菌培养：取米泔样粪便，接种于碱性蛋白胨水中，35℃增菌6 h 后，取表面生长物或菌膜，用划线分离法接种于碱性琼脂平板、庆大霉素平板或硫代硫酸钠-枸橼酸钠铀-胆盐-蔗糖(TCBS) 琼脂平板，35℃培养18~24 h ，观察菌落特征。该菌在TCBS 琼脂平板上可形成较大、黄色、微凸菌落。挑取可疑菌落5 ~ 10 个与霍乱弧菌多价"O"诊断血清作玻片凝集试验。对诊断血清凝集或不凝集的菌株，均应进一步作生化反应和种型鉴定。

(4) 副溶血弧菌培养：取黏冻状、血性或液状粪便，接种于碱性蛋白胨水增菌液，35℃培养6~8 h ，移种于TCBS 平板上。35℃培养18~24 h 后形成直径1.0~2.5 mm、隆起、绿色、湿润的菌落。取此菌落移种于TSI 和UMI 及无盐、高盐试验进行鉴定。

(5) 小肠结肠炎耶尔森菌培养：将粪便接种于耶尔森菌选择培养基(NYE) ，分别作22~25℃及35℃培养。患者的粪便或肛拭可在0.067 mol/PBS(pH7.4~7.8)中增菌(4℃) ，于7 日、14 日、21 日分别取0.1 ml 增菌液移种于选择培养基上。各种平板培养48 h 后，小肠结肠炎耶尔森菌在NYE 及麦康凯琼脂平板上呈乳糖不发酵菌落，较小、扁平、无色、稍隆起、透明或半透明。取此菌落移种于TSI 、UMI 等培养基，并作生化反应。

(6) 空肠弯曲菌培养：取液状或带血粪便，或在卡-布(Cary-Blair) 运送培养基中的标本立即接种于弯曲菌选择培养基，或先接种于CEM 增菌液，经42℃微需氧(85% N2、10 % CO2 、5 % O2 ) 培养48 h 后，移种于上述平板。在微需氧环境中42℃培养48 h 后观察其生长情况。空肠弯曲菌形成凸起、略带红色、有光泽、半透明、直径为1 ~ 2mm的菌落，如培养基表面较湿可扩散生长。各型菌落均不溶血。取此菌落作悬滴或压滴观察动力，可见呈摆动的投标样动力。革兰染色阴性，两端稍尖呈弧形或S 形。弯曲菌的鉴定必须结合多种试验加以鉴定。

(7)金黄色葡萄球菌培养：取绿色、海水样或糊状粪便接种于高盐甘露醇琼脂平板，35℃培养18~24 h 。挑取金黄色β 溶血菌落，涂片进行革兰染色，镜检。如查见革兰阳性球菌呈葡萄状排列，作凝固酶、厌氧甘露醇、耐热DNA 酶等试验加以鉴定。

(8) 艰难梭菌培养：取液状粪便立即接种于环丝氨酸头孢西丁果糖琼脂(简称CCFA) 平板上，并将粪便作10² ~ 10⁶ 稀释后定量接种。35 ℃厌氧环境下培养48 h 后，选择粗糙型黄色菌落，移种于葡萄糖庖肉培养基作毒素测定;同时制涂片，悬滴检查动力、革兰染色及生化鉴定。

(9) 真菌培养： 真菌性腹泻多继发于抗生素治疗后，常见的真菌性腹泻多由白念珠菌引起。将标本接种于含氯霉素的沙氏琼脂及血琼脂平板上，置25~30℃ 和35℃培养24~48 h，根据形态染色、菌落特征和芽管试验等进一步鉴定。

(10) 菌群失调的细菌学检验：选用多种培养基，包括强、弱选择肠道培养基、血琼脂平板、高盐甘露醇琼脂平板、Campy-BA 血琼脂平板、厌氧琼脂平板和沙氏琼脂等，将粪便接种于上述各种培养基后，分别培养于22℃、35℃、42℃需氧、微需氧及厌氧环境中，生长后按各类细菌分别进行鉴定，并观察其数量变化。

(11)气单胞菌的培养：取粪便标本接种于血琼脂平板或氨书西林血琼脂平板， 35℃培养18~24 h，挑取灰色、光滑、湿润的菌落进行氧化酶试验、葡萄糖O/ F 试验。怀疑气单胞菌时，进行全面的生化鉴定。

(12) 邻单胞菌的培养：取粪便标本接种于血琼脂平板和麦康凯琼脂平板上， 35℃培养18~24 h ，挑取灰色、光滑、不透明的菌落作氧化酶试验、葡萄糖O/ F 试验，怀疑邻单胞菌时，进行全面的生化鉴定。

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