微生物细胞大小和数量的测定

一、测定微生物的大小

1. 测定的工具：目镜测微尺    镜台测微尺

2. 目镜测微尺的校正：在高倍镜下，看清镜台测微尺的刻度后，转动目镜，使目镜测微尺与镜台测微尺的刻度平行，移动推动器，使目镜测微尺的0点与镜台测微尺的某一刻度重合，然后，仔细寻找两尺第二个完全重合的刻度。计算两刻度间目镜测微尺的格数和镜台测微尺的格数。由于镜台测微尺的刻度每格长10µm，所以可得：                     

目镜测微尺每格长度（ µm）=（镜台测微尺格数×10）/目镜测微尺格数

注意：校正目镜测微尺必须针对特定的显微镜和附件（特定的接物镜、接目镜、镜筒长度等）进行，而且只能在这特定的情况下才可重复使用。

3. 菌体大小的测定：取下镜台测微尺，将细菌染色标本置于载物台上，然后在油镜下用目镜测微尺测量菌体的长和宽。

二、测定微生物数量

方法：活菌计数法——平板菌落计数法；总菌计数法——血球计数板或霍瑟（Peroff  Hausser）细菌计数板（二者原理和部件相同，只是厚薄不同而已）。

本实验用血球计数板计数酵母菌的数量                                                 

1. 取清洁无油的血球计数板，在计数室上面加盖玻片。                                                          

2. 取酵母菌液，摇匀，用滴管由盖玻片边缘滴一小滴，使菌液自行渗入，计数室内不得有气泡。

3. 静止5min后，用低倍镜观察并将计数室移至视野中央。              

4. 在高倍镜下计数：随机计数五个中格的平均值，然后求得每个中格的平均值。乘上16（或25）就得出一大格中的总菌数，最后再换算到每mL菌液中的含菌数。

5. 计算方法：

酵母菌细胞数/mL=[（X1+X2+X3+X4+X5）/5]X 25（或16）X 10 X 1000 x 稀释倍数

6. 注意事项：压在方格线上的菌体，以压在底线和右侧线上的菌体计入本格内；遇到有芽体的酵母时，若芽体和母体同等大，就按单个酵母计数。

7. 计数完毕后，血球计数板要立即清洗干净，并用吸水纸吸干，最后用擦镜纸擦干净，并放回盒内。

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