细菌淀粉酶和过氧化氢酶定性实验及其生化特征观察

一、实验目的

通过对淀粉酶和过氧化氢酶的定性测定，加深对酶和酶促反应的感性认识

二、实验原理

酶是微生物机体内生物合成的一种生物催化剂，它是高分子蛋白质，具有催化生物化学反应加速进行，并具有传递电子、原子和化学基团的作用。微生物的酶按它所在细胞的部位分为胞外酶、胞内酶及表面酶。本实验对胞外酶中的两种即淀粉酶和过氧化氢酶(亦叫接触酶)进行定性测定。

细菌淀粉酶能将遇碘呈蓝色的淀粉水解为遇碘不显色的糊精，并进一步转化为糖，淀粉被酶催化分解后用碘检测不到其变色现象；过氧化氢酶能将过氧化氢快速分解为水和氧气，能用肉眼很容易的观测到产生的气泡。

三、仪器和材料

1、试管(15 mm-150 mm)4支、试管架1个、培养皿(90mm)3套、接种环。

2、肉膏胨、淀粉琼脂培养基1瓶(约50 ml)

3、0.2％淀粉溶液1滴瓶、革氏碘液1滴瓶、10％--3％过氧化氢1滴瓶。

4、生活污水活性污泥混合液或枯草杆菌培养液一瓶。枯草杆菌和大肠杆菌斜面各一支。

四、实验内容和操作方法

(一)生活污水活性污泥混合液中淀粉酶的测定

1．取4支干净的试管，按1、2、3对照编号。放在试管架上备用。

2．在1号、2号、3号试管内分别加入 5ml、10ml、15ml的活性污泥混合液，再在1号和2号试管中分别加10 ml和5 ml蒸馏水。在对照管内加15 ml蒸馏水。

3．在1号、2号、3号及对照管中分别加入O．2％的淀粉液若干滴(淀粉液的用量，在做预备实验时根据样品中淀粉酶含量多少而定)，迅速摇匀并记下反应的初始时间。

4．在上述4个管内分别加若干滴碘液(碘液用量在预备实验时酌定)，迅速摇匀，这时各管均呈蓝色。

5．观察结果。注意各管的变化，记下各管蓝色完全消失时的时间(即淀粉酶和淀粉反应完全的时间)，并对结果进行分析。

(二)细菌淀粉酶在固体培养基中的扩散实验

1．将肉膏胨淀粉琼脂培养基加热融化，待冷至45℃左右倒人无菌培养皿内(每皿约10 ml)，共倒3个，静置待冷凝即成平板。

2．在无菌操作条件下，用接种环分别挑取枯草杆菌、大肠杆菌和活性污泥各一环分别在3个平板上点种5个点。倒置于37℃恒温箱内培养24～48 h。

3．观察结果，取出平板，分别在3个平板内菌落周围滴加碘液，观察菌落周围颜色的变化。若在菌落周围有一个无色的透明圈，说明该细菌产生淀粉酶并扩散到基质中去。若菌落周围仍为蓝色，说明该细菌不产生淀粉酶。

(三)过氧化氢酶的定性测定

1．将配备的枯草杆菌和大肠杆菌斜面各1支放在试管架上。

2．用滴管吸取过氧化氢滴加入两管菌种斜面上，有气泡产生的为接触酶阳性(有过氧化氢酶)；无气泡产生的为接触酶阴性(无过氧化氢酶)。

五、实验结果

把所观察到的现象记录下来，进行分析。

六、思考题

1．淀粉酶定性测定中对照应呈什么颜色?为什么?各菌落呈什么颜色?为什么?

2．各菌落滴加过氧化氢后呈什么现象?说明什么问题?

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