病原性真菌实验

真菌是一大类不含叶绿素，无根、茎、叶，由单细胞或多细胞组成的真核细胞型微生物。大部分真菌对人类有益，能引起人类疾病的病原性真菌主要包括浅部真菌和深部真菌。

实验目的：
观察真菌的基本形态及菌落特点，了解浅部及深部真菌的检查方法。

实验内容：

一、常见单细胞真菌的形态观察
1、新型隐球菌墨汁负染色片：可见菌体呈球形，大小不一，有很厚的荚膜，包围在菌体周围，透明发亮，并可见发芽的菌体。
2、白色念珠菌菌体形态：用患者的棉拭子标本常法涂片，革兰氏染色，镜检。显微镜下可见菌体呈卵圆形，较葡萄球菌大2-5倍，细胞出芽伸长而成假菌丝，在假菌丝生长点上有芽生孢子及沿假菌丝顶端生长的大而圆的厚膜孢子。

二、皮肤丝状菌的检查
材料：
病人的甲屑、皮屑或毛发、10%KOH溶液、载玻片、盖玻片、小镊子、普通光学显微镜等。
方法：
1、采标本：用钝刀在手、足、体癣损害部位边缘轻轻刮取皮屑，甲癣可用小刀刮取病损指（趾）甲深层碎屑。
2、制片：用小镊子取少许皮（甲）屑标本置于载玻片中央，滴1-2滴10%KOH溶液，覆加一盖玻片，在火焰上缓慢加热，以加速角质溶解，使标本透明，然后轻轻加压使成薄片，驱走气泡并吸去周围溢液。
3、镜检：先用低倍镜观察有无真菌菌丝或孢子，再用高倍镜观察菌丝、孢子的特征。镜检时光线应稍弱，使视野稍暗。阳性标本常可查见分支菌丝或孢子。

三、真菌的培养
材料：
菌种、沙保氏培养基、平皿、载玻片、盖玻片。
方法：
1、一般培养：分别将新型隐球菌、白色念珠菌、絮状表皮癣菌接种于沙保氏培养基，于22℃-28℃下培养（深部真菌可培养于37℃环境），一周后观察菌落特征。真菌菌落在形态上可分为三大类：
酵母型菌落：与细菌菌落相似，圆形、白色、边缘整齐、表面光滑湿润。
类酵母型菌落：同酵母型菌落，圆形、较大、白色，但菌落根部有假菌丝长入培养基内。
丝状菌落：是多细胞真菌的菌落形式。有许多疏松的菌丝体构成，菌落呈棉絮状、绒毛状或粉末状，菌落中央有皱折，外围有放射状沟。其正面和背景又可显示各种不同颜色。
2、小培养（玻片法）：在无菌平皿中先倾注10-15ml沙保葡萄糖琼脂，待凝固后，无菌操作将琼脂切成约0.5cm的方块，再将琼脂块移放在灭菌的载玻片上，然后在小块培养基四边接种已分纯的真菌菌种，盖上无菌盖玻片，移入有一定湿度的无菌平皿内，置22℃-28℃孵育。动态观察生长过程，根据菌丝和孢子的特点鉴定真菌类别。

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