免疫印迹法检测幽门螺杆菌抗体结果分析

【摘要】  目的 评价免疫印迹法检测Ⅰ型和Ⅱ型幽门螺杆菌抗体的价值。 方法 采用免疫印迹法对门诊随诊患儿227例进行分型检测。 结果 检出HP阳性85例,阳性率为37.44%,其中Ⅰ型58例,占68.23%;Ⅱ型27例,占31.76%。 结论 免疫印迹法检测幽门螺杆菌抗体具有较高的敏感性和特异性。方法简单，时间短,对临床治疗有重要的指导意义。

【关键词】  幽门螺杆菌 免疫印迹法 空泡毒素 细胞毒素相关基因A

幽门螺杆菌（Helicobacter,简称HP）是慢性胃炎﹑消化性溃疡和非溃疡性消化不良的重要因素，是胃癌的危险因子。HP在全球人群的感染率超过50%，而且随着年龄的增加有递增趋势［1］。表达空泡毒素（VacA）蛋白和细胞毒素相关基因A（CagA）的HP菌株致病力强。本文对患儿血清用免疫印迹法进行检测并分型,探讨不同型别HP与患者的关系，及时指导临床治疗。

　　1  材料与方法

　　1．1  样本  于2006年8月～2007年8月到我院门诊患儿，抽血2ml，留取血清待查。

　　1．2  试剂与方法  采用免疫印迹法进行分型，试剂盒由上海元谷科技发展有限公司提供。本试剂原理是先将幽门螺杆菌的混合抗原用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳，按分子量大小不同分开，再将其转移至硝酸纤维膜，如果被检血清有相应抗体，应用酶联免疫吸附反应，就会在抗原的相应位置出现显色区带，即可判断HP感染类型。

　　1．3  抗体判断  将印迹膜上端起始线与标准带起始线对齐，在对应位置出现带型既可判断为相应的抗体:①128KD﹑116KD出现显色带或128KD单独出现，可同时伴有110KD显色判断为CagA（+）抗体；②95KD﹑91KD出现显色或95KD单独出现，可同时伴有87KD显色带判断为VacA（+）抗体；③66KD出现显色带判断为尿素酶B(UreB)(+)抗体;④30KD出现显色带判断为尿素酶A(UreA)(+)抗体。

　　1．4  分析结果  ①CagA或VacA抗体同时阳性或任意一种阳性，为Ⅰ型HP感染；②仅出现尿素酶A和尿素酶B抗体阳性，为Ⅱ型HP感染；③CagA， VacA及Ureas三种抗体阴性，既为HP抗体阴性。

　　2  结果

　　2.1  227例患儿  HP感染85例，阳性率为37.44%,其中Ⅰ型58例,占68.23%;Ⅱ型27例,占31.76%,见表1。

　　表1  227例患儿HP感染结果（略）

　　2.2  不同年龄段HP感染情况  见表2。

　　表2  1～14岁不同年龄段HP感染情况（略）

　　3  讨论
   
　　目前临床上根据HP菌株及是否表达相应蛋白将HP分为两种类型：Ⅰ型为产细胞毒素HP菌株，能产生空泡毒素和细胞毒素相关蛋白，其致病力强，能导致广泛的炎症，Ⅱ型为不能产生细胞毒素的HP，不含细胞毒素相关基因A(CagA)，不表达VacA毒素和CagA蛋白，这类菌株毒性小，感染后一般仅引起轻度慢性浅表性胃炎而无明显的临床症状［2］。据文献［3,4］报道，CagA蛋白是Ⅰ型HP致病性的标志物，现已确认HP是慢性活动性胃炎﹑消化性溃疡﹑胃黏相关淋巴组织（MALT）淋巴瘤和胃癌的致病因素。1994年世界卫生组织/国际癌症研究机构（WHO/IARC）将幽门螺杆菌定为Ⅰ型致癌原。HP作为胃癌的Ⅰ类致癌因子，其中CagA与 VacA是在致癌过程中关键的毒力因子。HP穿透粘液层在胃上皮细胞表面定居，对胃上皮细胞和胃粘膜屏障等造成破坏作用，刺激上皮细胞增殖，改变增殖与凋亡的关系。VacA可使上皮细胞空泡样变性﹑损伤﹑坏死及溃疡，CagA本身无细胞毒性，但与VacA的转录等功能有关。另外，我国HP成人感染率已达60%～80%［5］,血清学检查绝大部分均为阳性，因此，HP进行分型检测特别重要，能及时指导临床治疗。本文通过免疫印迹法对227例患儿进行CagA、VacA、UreA、UreB抗体检测，结果显示：HP感染85例，阳性率为37.44%，略低于成人感染率［5］，而且HP感染率随着年龄增加而增加，与文献［1］报道基本一致。免疫印迹法是一种可靠的诊断HP感染的非入侵性方法,它的特异性和敏感性都较高且方法简单,且能定性分析蛋白质各组分,与其它方法相比,具有操作简单易行不需要昂贵的仪器,安全准确等优点,特别适合不适宜进行胃镜检查或不需要胃镜检查的患者,病人易于接受,及时指导临床治疗并且可用于流行病学调查。

【参考文献】
  　　［1］ 胡伏莲.幽门螺杆菌感染的流行病学［J］.（总97《中国医刊》）,2007,42(2):17～18.

　　［2］ 王蔚虹,胡伏莲.幽门螺杆菌的分子生物学［M］.北京:中国科学技术出版社,1997,170.

　　［3］ 王思平.幽门螺杆菌VacA基因致病机理及胃十二指肠疾病的关系［J］.国外医学消化系统疾病分册,1997,17(3):141.

　　［4］ 张尤力. 幽门螺杆菌VacA基因型和CagA基因及其表达产物［J］. 国外医学消化系统疾病分册,1997,17(3):141.

　　［5］ 蒋丽蓉,许幼如,张凤富.胃肠病患者幽门螺杆菌感染若干情况的研究［J］.中国内镜杂志,1998,4（1）:301.