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植物组培茎尖培养


录入时间:2011-12-28 9:55:06 来源:互联网

  

概念:是切取茎尖部分或茎尖分生组织部分,进行培养的过程。这是组织培养中用得较多的外植体。因为茎尖分生区是四个分区的主要部分。

 

茎尖培养可分为微茎尖培养和普通茎尖培养。

 

1)微茎尖:指带有1-2个叶原基的生长锥,其长度不超过0.5mm()

 

2)普通茎尖:指取几mm到几十mm长的顶芽尖及侧芽尖。这里主要介绍后者。

 

特点:技术简单,操作方便,易成活和分化,成苗时间短。

 

步骤如下:

 

   1.取材:挑选洁净、无污染,生长不久的茎,从植物的茎、藤或匍匐枝上切取2cm以上的顶梢。木本植物可事先对茎尖喷几次灭菌药剂。用于普通茎尖培养。

 

   2.消毒  将采到的茎尖切成0.51.0cm长,并将大叶除去,休眠芽预先剥除鳞片。()将茎尖置于流水冲洗干净,再在95%的酒精中处理30秒,然后在稀释20倍的次氯酸钠中浸5~8分钟,最后用无菌水冲洗数次,沥干后准备接种。

 

   3接种  为了减少污染,在接种前再剥掉一些幼叶,使茎尖为0.5cm大小左右。用作快速繁殖。

 

注意:一要防褐化。接种时,不用锈刀,动作敏捷,随切随接,用15%VC液浸泡处理。

 

      二要防干燥

 

   4.培养

 

   1)培养基:采用MS培养基或略加修改,或补加其它物质。也可用其它培养基如White,Heller等。

 

培养基中生长素是必须的,如2,4-DIAA,NAA等,但是浓度不能太高,一般用0.1mg/L左右,若高易产生畸形芽或形成愈伤组织。

 

2)培养问题处理:

 

茎尖在培养过程中会出现生长太慢、生长太快和生长正常等三种类型。

 

I生长太慢:接种后茎尖不增大,只是茎尖逐渐变绿,出现绿色小点,细胞逐渐老化而进入休眠状态,或者逐渐变褐死亡。引起原因的是生长素浓度太低,或是温度过低或过高;

 

II生长太快型:是接种后茎尖迅速增大,在茎尖基部产生愈伤组织,并迅速增殖,而茎尖不伸长,久之茎尖也形成愈伤组织,从而丧失发育成苗的能力。引起原因一是生长素浓度过高,引起细胞疯狂分裂而导致愈伤组织的形成。二是光照太弱或温度太高。

 

III生长正常型是接种后茎尖基部稍增大并形成少量愈伤组织,茎尖颜色逐渐变绿,并逐渐伸长,叶原基发育成可见的小叶,进而形成小苗。

 

   3)培养条件:培养时每天光照可长一些,最长达16h/d,照度1500-3000Lx,温度25±2℃。并且根据不同植物种类,或者随培养过程的不同,给予适当的昼夜温差等处理。

 

注意:防培养基干燥,由于茎尖培养时间较长,通过定期转移、严加封口等。一般茎尖培养在40天左右可直接长成新梢。

 

   3)继代培养  用茎段切割法。

 

继代培养可用MS0培养基。或用生长物质较低的MS培养基。

 

也可边增殖边生根培养

 

   4)诱导生根

 

I 1/2 MS培养基, 并只加入生长素类调节物质,如NAA IBA等。注意浓度

 

II)也可将切下的新梢基部浸入50100ppmIBA溶液处理48小时,然后转移到无激素的生根培养基中。

 

III注意较高浓度的生长素对生根有抑制作用。

 

5移栽驯化

 

指标:发现新梢基部生有较浓密的不定根,生长健壮而发达,长度在1cm以内。

 

移栽:可先进行几天炼苗程,取出---洗培养基--栽入驯化器皿—基质蛭石:珍珠岩:草炭土为1:1:0.5

 

    栽后管理:1)初期保持湿度。基质浇透水,床面浇湿,搭小拱棚等,并且初期要常喷雾处理,2)后期逐渐减少湿度。拱棚两端打开通风,减少喷水次数。以后揭去拱棚,并控制水分。

 

    温度管理上要掌握适宜的生根温度,最适宜的温度是1620℃,春季地温较低时,可用电热线来加温。

 

    光照:初期弱光照,加盖遮阳网或报纸等,后期可直接利用自然光照。

 

 

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