(1)间接ELISA(1ELISA)
我国现已建立了间接ELISA方法,但目前应用还较少。间接ELISA试验中,多是以光滑型脂多糖(sLPS)作为抗原的,这些方法大多已通过田间试验并得到了验证,并正在被广泛应用。lELISA高度敏感,但不能鉴别牛种布氏杆菌19号疫苗接种所产生的抗体。不同的间接ELISA试验程序都比较相似,脂多糖抗原包被ELISA板,PBST洗涤后加入待检血清,再依次加入酶标二抗、底物和终止液,用酶标仪测光密度值并判定结果。ELISA常用反应率来判定结果,即样品OD值/阳性对照OD值×100%。
间接ELISA在检测感染牛时其敏感性等于或大于BBAT,在检测未免疫的牛时其特异性与CFT相同。根据所设定的临界值不同,在检测免疫牛时其特异性可能会低于CFT。
(2)竞争ELISA
我国目前还未见有布氏杆菌病竞争ELISA试验的报道。该方法应用了单克隆抗体,其特异性明显高于间接ELISA。竞争ELISA可以排除牛种布氏杆菌19号疫苗所产生抗体的影响。其试验程序首先为包被脂多糖抗原,PBST洗涤后加入单克隆抗体(M84),再立即加入待检血清,温育后再加入酶标羊抗鼠IgG,然后依次加入底物和终止液,用酶标仪测光密度值并判定结果。其结果常采用反应率来判定。
竞争ELISA在检测感染牛时其敏感性等于或大于凝集试验,与间接ELISA相当。在检测未免疫牛时,其特异性等于或大于CFT和间接ELISA。在检测牛种布氏杆菌”号近期免疫牛时,其特异性会低一些.但在检测过往免疫动物时,其特异性要显著升高。
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