植物组织培养离体叶培养

录入时间:2011-12-29 9:52:12 来源：互联网

离体叶培养包括叶原基、叶柄、叶鞘、叶片、子叶在内的叶组织的无菌培养。它大多经脱分化形成愈伤组织，再经再分化生出不定芽和不定根。

应用：不仅可用于研究形态建成、光合作用、叶绿素形成等理论问题，而且也是繁殖稀有名贵品种的有效手段。

叶培养特点：材料来源广泛，数量大，容易培养，尤其对木本植物，生成的愈伤组织完整，数量多，较迅速等。

叶片再生能力：以羊齿植物最多，双子叶植物次之，单子叶植物最少。

再生方式：一种是直接诱导形成不定芽，另一种是先诱导形成愈伤组织，再经愈伤组织分化成植株，叶的离体培养技术如下：

１．材料选择及灭菌选择健康洁净的植株，取其较幼嫩叶片，冲洗干净，用70%酒精漂洗约10秒，再在饱和漂白粉液中浸3～15分钟，或在0.1%升汞中浸3～5分钟，以前者为佳。用无菌水冲洗数次，再放在无菌的干滤纸上吸干水分，以供接种用。对一些粗糙或带茸毛的叶片要延长灭菌时间。注意要选择成熟的叶片。

２．接种将叶片切成约0.5cm见方小块或圆片及薄片（如叶柄和子叶），注意选择切块位置。MS培养基附加BA　1～3，NAA0.25～1。

３．培养培养条件为每天10～12小时光照，光强1500～3000Lx。

1）培养2－4周，叶切块开始增厚肿大，进而形成愈伤组织。2）转移到分化培养基上进行培养，其培养基的BA含量为2左右，约再过10天左右，愈伤组织开始转绿出现绿色芽点，形成不定芽。通过继代培养和生根培养，完成整个组培过程。

叶的培养比胚，茎尖和茎段培养难度大。首先要选用易培养成功的叶组织，如幼叶比成熟叶易培养，子叶比叶片易培养。其次要添加适当的生长素和细胞分裂素浓度，保证利于叶组织的脱分化和再分化。