微生物技术资料
文章检索
  首页 > 微生物知识->植物组织培养基本知识->植物组培之花药培养

植物组培之花药培养


录入时间:2011-12-30 9:31:14 来源:互联网

 

花药培养

 

 花药培养改变花粉的发育程序,使其分裂形成细胞团,进而分化成胚状体,产后再生植株,或形成愈伤组织,由愈伤组织再分化成植株。

 

 1.1 花药的材料选择

 

一般选择单核期 此时细胞核较大居中,称单核中央期。随着细胞体积迅速增大,细胞核由中央位置推向一边,即单核靠边期。以上均为单核期花粉。

 

单核期的确定 根据细胞观察推测,双核期的花粉中开始积累淀粉,不能使花粉发育成植株。通常采用醋酸洋红或碘化钾染色,再压片镜检,以确定花粉的发育时期。但是接种前不可能把所有的花粉都进行一次发育时期的镜检,通常是按照花蕾长度大小与花粉发育年龄的相关性,在实际操作中取一定大小的花蕾进行的。如水稻选择剑叶叶枕抽出距下一叶,叶枕约为46cm的孕穗稻。

 

 1.2培养基的选择

 

花药培养所采用的培养基是MSN6B5等。添加的激素有6-BAKT和玉米素, 2.4-DNAAIAA等。诱导愈伤组织的培养基可添加2.4-D,其浓度为13mg/l,分化培养基可添加23mgBA再加少许的IAA0.20.5mg/l),生根培养基可单独添加生长素(0.5 1mg/l)。

 

基本培养基中的蔗糖浓度对花粉的诱导生长有一定作用。在辣椒花药培养中以6%的蔗糖浓度对胚状体的诱导率为最高。

 

 1.3消毒接种培养

 

花药消毒,从健壮无病植株采集花蕾,因为未开放的花蕾中的花药为花被包裹,本身处于无菌状态,可仅用70%酒精棉球将花的表面擦洗即可。也可按对其它器官消毒处理方法进行,先用70%的酒精浸一下后,在饱和漂白粉溶液中浸1020min,或用0.1%升汞液消毒710min,然后用无菌水洗35次。

 

消毒前预处理,将花蕾剪下放入水中,在冰箱45℃下保持34天。低温贮藏后,花药容易发生胚状组织。接种时把花蕾用解剖刀、镊子小心剥开,取出花药,注意去掉花丝,然后散落接种到培养基上,一个10ml的试管可接种20个花药。

 

培养条件:培养温度在2328℃左右,每天1116h的光照,光照强度20004000lx

 

培养历程:脱分化培养时,可用MS+2.4D的培养基,或N6+2.4D的培养基,经1030天,可诱导生成愈伤组织,或少数生成胚状体。愈伤组织增殖到13mm左右时,应转移到加有细胞分裂素和微量生长素的新的分化培养基上,再经2030天,可获花粉植株。

 

1.4花药培养中的花粉发育过程

 

①营养细胞发育途径

 

在花药离体培养中,花粉第一次有丝分裂形成不均等的营养核和生殖核。生殖核较小,一般不分裂或只分裂12次,就逐步退化。而体积大的营养核经多次分裂且形成了细胞壁,最后变成了多细胞团,迅速生长,很快实破细胞壁,细胞不断分裂,可以产生胚状体或愈伤组织。

 

 ②生殖细胞发育途径

 

在这种途径下,营养核只分裂12次就退化了,而生殖核经多次分裂发育成多细胞团。

 

 ③营养细胞和生殖细胞同时发育的途径

 

 花粉第一次有丝分裂形成的营养核和生殖核同时进行多次分裂,因此最后形成的多细胞团包括两部分,一部分细胞较大的是由营养细胞分裂而来;另一部分细胞较小的是由生殖细胞分裂而来。

 

 ④花粉均等分裂途径

 

 花粉进行均等分裂形成两个均等的子核,以后二核间产生壁,形成两个子细胞,由两个子细胞形成多细胞团,迅速生长,穿破药壁而形成胚状体或愈伤组织。

 

 

上一篇:植物组培胚珠和胚乳培养

下一篇:植物组培之花粉培养

相关文章:
植物培养基的组成成分 植物组培之花粉培养
植物组培胚珠和胚乳培养 植物组培胚胎培养
植物组培生殖器官培养 植物组织培养离体叶培养
植物组培茎段培养 植物组培茎尖培养
植物组培离体根培养 植物组培愈伤组织形态发生的调控
首页 | 关于我们 | 网上商城 | 加入收藏 | 在线客服 | 网站地图| 联系我们
地址:青岛市李沧区龙水路318号D座
电话:400-0532-596 0532-66087773
66087762、81935169

传真:0532-81935080 66087775

邮箱:qdhbywg@vip.126.com

QQ:4000532596

投诉与建议
电话:13105190021 13006536294
邮箱:hopebiol@163.com
©2001- 版权所有 青岛高科技工业园海博生物技术有限公司 鲁ICP备05018323号