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植物组培之花粉培养


录入时间:2011-12-30 9:32:47 来源:互联网

 

   花粉培养是指把花粉从花药中分离出来,以单个花粉粒作为外植体进行离体培养的技术。由于花粉已是单倍体细胞,诱发它经愈伤组织或胚状体发育成的植株都是单倍体植株。且不受花药的药隔、药壁、花丝等体细胞的干扰。但缺点是较比花粉培养难度大。

 

 2.1花粉的分离

 

 取新鲜未开的花蕾用自来水冲冼10min,以75%的酒精消毒1015min,无菌水冲冼2次,再用10%漂白粉上清液浸泡20min,无菌水冲冼34次。然后将花药放到加有基本培养基的小烧杯中,用注射器的内管在烧杯的壁上挤压花药,使花粉从花药中释放出来。用尼龙筛过滤掉药壁组滤液再经低速离心(100160rpm),上面的碎片可用吸管吸掉,再加入新鲜培养基。连续进行两次过滤,到每毫升含103104个花粉的浓度就可以了。

 

 简单的方法是花粉从花药中挤出后,用镊子取出花粉空壳,放在培养基上培养。此法适于微室栽培,但往往有药壁等体细胞混入。

 

 2.2花粉的预处理

 

 ①低温处理

 

在花粉第一次有丝分裂期进行低温处理。②重力的作用

 

在从花蕾中取出花药前1小时,在5℃条件下进行低温离心机离心,可提高单倍体的诱导率。

 

 2.3培养基成分

 

在花粉培养中可添加一些物质,有促进生长的作用。培养基选用Nitsch作基本培养基,含有诸如硝酸钙、硫酸、柠檬酸铁、酵母浸出液和椰子胚乳等。

 

  2.4花粉培养方法

 

 ①微室培养法

 

 取含有5080粒花粉的一滴培养液放在微室培养装置中,为了防止花粉破裂,应在低倍条件(4℃以下)接种,然后在20℃下培养。

 

 ②看护培养法

 

在装有50ml液体培养基的小培养皿中,用解剖针撕开花药释放出花粉,形成花粉悬浮液,最后稀释至0.5ml培养基中,含有10个花粉粒的细胞悬浮液。看护培养时,把花药放在琼脂培养基表面上,然后在每个花药上覆盖一小块圆片滤纸。用移液管吸取1滴已准备好的花粉粒悬浮液,滴在每个小圆片滤纸上。培养在25℃和一定光照强度下,大约一个月长出细胞群。由于完整的花药发育过程释放出有利于花粉发育的物质,并通过滤纸供给花粉,促进了花粉的发育。

 

 

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