菊花花瓣培养

    菊花茎尖培养是在适宜的条件下，大多经培养直接诱导产生植株。而花瓣培养则要去分化，先形成愈伤组织，从愈伤组织再分化产生完整的植株，有的则可产生胚状体而长成完整植株。由于在培养中需经过愈伤组织途径，有去分化和再分化的过程，因而由花瓣培养产生的植株往往有变异产生，表现在植株、叶形、花色、花形等多方面变异，如小苗叶片的叶形、厚薄、缺刻深浅变化。光周期性变化，从短日性变为中日性。株型、花色、花型、瓣型等变化，所以花瓣培养可用来进行菊花新品种的繁育。且其与杂交育种和辐射育种相比，有节省设备和人力、简便易行、机遇高等优点。此外花瓣植株是通过愈伤组织途径产生的，不带病毒，所以对没有产生变异类型的菊花来讲，也可起到复壮提高种性的作用，故花瓣植株表现也生长健壮，花大而艳丽。

    1)菊花花瓣培养的方法 

取菊花开花前2～3天已露白的花蕾，整个剪下，在自来水下冲洗十几min，然后在无菌条件下，用75%的酒精浸泡10～15min进行表面灭菌，后用无菌水冲冼两次，再用10%的漂白粉澄清液浸泡20min，再用无菌水冲洗3～4次。然后用无菌滤纸吸干水分， 

接种　用剪刀取舌状花，再用解剖刀切取舌状花约5mm见方大小，接种到MS基本培养基上，添加BA 1～3mg/l， NAA0.5～2mg/l。 

培养条件：接种后置于温度25℃左右，光照强度2000lx，每天照光12小时的条件下培养。 

培养过程：花瓣培养10天左右，开始产生愈伤组织，成一圆块状，色淡黄至嫩绿， 

胚状体培养　培养20～30天后，从愈伤组织分化产生根系，以后又分化出芽点，但不成轴状结构。有些品种在愈伤组织生长30天左右，表面可出现大量绿色圆粒状物，用放大镜可观察到似鱼卵群集，即分化形成了胚状体，这是花瓣体细胞产生的，故为无性胚，数量大、成苗多。生长到40～50天后则可见到大量的芽生长产生。 

再分化培养　有些愈伤组织还需转移到分化培养基，才能诱导分化得到花瓣苗。分化培养基在原来诱导基础上，降低其中的生长素浓度或提高细胞分裂素的浓度。配制好分化培养基，将愈伤组织切成约5mm大小接入，约20～30天培养，又可分化出植株。 

生根培养　最后需转移生根培养基，当芽高具3～4片叶时，移入NAA0.3mg/l的MS培养基中，约经2周培养，产生数条根系，即可得到完整的试管花瓣植株。 

菊花无病毒苗的培养 

    菊花为多年生宿根无性繁殖作物，常年靠分离母体的一部进行繁殖，因此病毒代代相传，在母体中逐代积累，浓度越来越高，影响植株的生长趋势、花形、花色、花的大小和产花量，过去一直没有较有效的方法克服，现在证明用组织培养的方法可根除或减缓病毒的影响。 

    危害菊花的病毒有：①菊花斑纹病毒,造成叶上有轻斑纹，叶脉透明，花瓣上也有斑纹。②菊花矮缩类病毒，受害株比正常株矮1/2～2/3，叶有黄色斑点或成带状，花小，开花早。③菊花轻斑驳病毒，叶有轻微斑纹，花褪色，也有斑。④蕃茄不孕病毒,叶片大多无病症,表现花形小，花瓣生长不整齐，有萎蔫现象。此外还有畸花病毒、绿花病毒、褪绿斑驳病毒、花叶病毒等。 

    1)茎尖培养脱毒 

切取顶芽或腋芽3～5cm，去掉展开的叶，只留护芽的嫩芽。先用自来水冲冼，用0.1%升汞或饱和漂白粉上清液对材料进行表面灭菌，再用无菌水涮冼数次。在双筒解剖镜下剥离生长点，分离到0.5mm以下，一般带2个叶原基。分离出的茎尖，生长点朝上，迅速接种或放置灭菌水表面，以防茎尖脱水。 

菊花无病毒可用指示植物鉴定法、抗血清鉴定法、电镜检视法等检测。如果检测时仍有病毒存在，就应淘汰该植株。如果已证明脱除了主要危害的病毒，只要取得一株无毒苗即可繁殖大量的无毒种苗。这样经严格鉴定的去毒苗，称为原原种，原原种种源应保存在试管里和有隔离条件和消毒制度的保护区域里栽培，以防止再度遭到病毒的侵袭。由原原种繁殖产生的植株称为原种。在有试管繁殖的条件下，可以年年栽培原种种苗，保证无病毒的影响。 

   2)热处理脱毒 

菊花也可采用热处理方法来进行脱毒，在35～36℃的条件下栽培两个月，可以达到脱毒的效果。但是热处理只能除去菊花矮缩类病毒和蕃茄不孕病毒，而不能除去菊花轻斑驳病毒和褪色斑驳病毒，后者只有通过茎尖培养途径脱毒来达到目的。

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