菊花的组培快速繁殖

菊花的组培快速繁殖 

    1)外植体的选取、灭菌和接种 

用于快繁的外植体很多，如茎段、侧芽、叶、花序梗、花序轴、花蕾等，下面以茎尖和茎段、花序轴、花蕾为外植体说明。 

A）选取无病虫害、粗壮的茎尖和茎段，要求叶密茎粗，以利于将来分化迅速，无性系后代质量好。选茎尖时嫩叶不要去掉太多，以免伤口面过多，过多的叶可在灭菌后、接种之前除去。选茎段时先除去叶，留一段叶柄，灭菌水洗后，将茎段面及叶柄再切出新茬。接种时注意极性，尤其是茎尖不可倒置或侧植。 

B）花序轴应选取具该品种典型特征的、饱满充实的蕾，最好要开放而未开放的花蕾，这时花瓣外有一层薄膜包围，里面洁净无菌，采后便于表面灭菌。过于幼嫩的花蕾，不便灭菌和剥离。 

C）取花蕾时在取材前2－3周，最好把母株置于温室内培养，不浇水，在接种前选择直径4～6毫米的花蕾剪下，常规消毒。将已经灭菌的花蕾纵切成大致相等的4～6小块，然后接种到芽诱导培养上，MS+BA0.1,经过10～15天的培养，外植体就会形成愈伤组织。再经过20～30天的培养，愈伤组织分化出较多的丛生芽，这时就可将其分割成数块继代培养，配方同诱导培养基。

    2)培养基及培养条件

    适用于菊花的培养基种类很多，如MS、B5、N5、white等等。但大多采用MS培养基，添加6-BA 2～3mg/l，NAA 0.02～0.2mg/l。菊花对激素的要求并不是很严格的，适用的范围很广。菊花试管培养的温度范围较宽，22～28℃都可以，以24～26℃最好。培养室光照时每天12～16小时为宜，光强1000～4000lx较好。

    3)继代培养

    外植体经培养后，一般经4～6周，茎尖直接分化出新芽，或经愈伤组织分化出新芽；茎段、花序轴侧芽萌发，可产生1～ 数个芽。最初分化率及分化数量都较少，但随继代次数增加。增殖方式除诱导丛生芽增殖外，也可用茎切段作微型扦插繁殖。丛芽增殖时，将芽丛切或小块，转到分化培养基中即可。微型扦插则以嫩茎梢作材料，将嫩梢剪成1节带1叶的茎段。然后将切段基部插入MS0或MS+NAA0.1的培养基中培养，4～5周后，腋芽即生长成小植株，再照上述方法切剪茎段，重复培养。

    4)生根和移栽

    菊花无根苗生根一般较容易，通常在增殖培养上久不转瓶，即可生根，但这种根的根毛较少或无，不利将来移栽和生长，所以常用下列方法处理：

    一是无根苗的试管生根 切取3cm左右无根嫩茎，转插到1/2MS+NAA（或IBA）0.1的培养基中，经两周即可生根。然后再进行移栽驯化，移栽初期保持高湿度条件，营养钵基质浇透水，取出生根的试管苗，洗掉附着在根部的培养基，用竹签在基质上打一小孔，将幼苗插入基质中。然后加设小拱棚以保湿，随着幼苗的生长，逐渐降低空气湿度和基质含水量，转为正常苗的管理阶段。

    二是无根嫩茎直接插植到基质中生根。利用菊花嫩茎易于生根的特点，可免去试管生根一道之序。剪取2～3cm无根苗，插植到珍珠岩或蛭石的基质中，基质事先用生根激素溶液浸透，10天后生根率可达95～100%。

菊花用组织培养快速繁殖，一般4～6周为一个周期，增殖倍率均在5～10倍以上。若以5倍计算，平均以40天为一个周期，一年可获得100～900万株苗，比常规繁殖快数千倍。

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