标准菌株的复活、传代及性能确认

1 标准菌株的复活

    标准菌株一般为安培装冻干粉剂，依照随产品附有的菌种复活方法，以及《人间传 购回的标准菌株 标准菌株 染病微生物分类目录》和《实验室生物安全通用要求》，在相应的生物安全水平下，开启包装。用 75%酒精棉球擦拭安培瓶上部，可用砂轮或锉刀在安培瓶上部划一小痕迹，用无 菌纱布包住安培瓶，两手分别捏住安培瓶上下两端，稍向外用力便可打开安培瓶。 依据菌株特性选择合适的培养基和培养条件，用无菌吸管吸适量的液体培养基加到冻干块 上，吹打混匀成悬液，将全部悬液移入含有 5ml 合适的液体培养基中，将管中残留的几滴悬 液移种到斜面上，适宜的温度培养一定的时间。观察生长状况，可适当延长培养时间。

2 菌株的性能确认

2.1 纯度检查 菌落形态 取复活后的培养物， 在相应的鉴别平板或非选择平板上划线分离， 培养出单菌落， 观察菌落形态是否符合该菌株要求，同一平板上的单菌落大小，形状、颜色、质地、光泽是 否相似， 对于出现两种以上形态的菌株， 应再分别挑取单菌落划线， 检测是否出现相同特征。

2.2 细胞形态 取划线平板上的单菌落，革兰氏染色反应应符合要求，且呈现一致性。

2.3 生化鉴定 必要时进行生化鉴定

2.4 污染处理 如发现菌株有污染， 挑选目标菌培养成功后， 将培养物灭菌销毁 （121℃30min）

3 菌株的传代

3.1 标准储备菌株的制备 标准储备菌株是在经多次传代后制备的多份相同的菌株。 将复活后经过性能确认的菌株的斜面培养物，用 0.85%的灭菌生理盐水 0.5ml 洗斜面菌苔成 菌悬液 将上述菌悬液吸入灭菌管中，加入 0.5ml40%的灭菌甘油，混匀，密封。保藏温度为—18℃

3.2 工作菌株的制备 由冻干或超低温保存的标准储备菌株经一次传代得到的菌株。 工作菌株不宜再传代， 工作菌 株使用和储存过程中严格遵守无菌操作，即不存在交叉污染，可以多次使用。保藏温度为 4-6℃

3.3 制备好的菌株应由室主任统一编号，标识，专人专柜保藏。

上一篇：恙虫病立克次体

下一篇：几种培养基的配制原则