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致泻性大肠埃希氏菌——快速酶触反应



录入时间:2012-2-17 14:01:42 来源:互联网

    致泻性大肠埃希氏菌能使人类致病,监诊表现主要为严重腹泻,多数表现为败血症。根据血清型别、毒力和所致临床症状可分为产肠毒素性大肠埃希氏菌(ETEC)、肠致病性大肠埃希氏菌(EPEC)、肠侵袭性大肠埃希氏菌(EIEC)、肠出血性大肠埃希氏菌(EHEC)以及肠粘附性大肠埃希氏菌(EAEC)五类。

    快速酶触反应:

    大肠埃希氏菌具β-葡萄糖醛酸酶,但以O157:H7为代表的肠出血性大肠埃希氏菌(EHEC)却不具此酶。


    毒素及毒力因子检测:包括LT、ST、Hly、SLT、Stx、EaeA、VT、EAST等,过去多用动物或细胞培养测定,现可用其单抗以多种免疫学手段检出,也可用基因探针技术或PCR等分子生物学技术检测。同时检测Hly和SLT基因,能快速检测和鉴定EHEC菌株,并与EPEC区分开来。


    基因探针和PCR技术:国内徐建烟根据溶血素hlyAB基因序列设计了鉴定EHEC的特异DNA探针,敏感性特异性达99%。Fortin将套式PCR技术和荧光探针技术相结合来检测O157,该方法不仅可以鉴定与O157抗血清有交叉反应的菌株,而且灵敏度高,可检测牛奶和苹果汁中102CFU/ml,的细菌,如果先进行6h增菌,可检测1CFU/ml的细菌。
基因芯片:Chizhikov将6个编码大肠杆菌细菌抗原和毒力的特异基因探针(EaeA,SltI,SltII,FliC,RfbE,IpaH)点样在玻片上,取多重PCR扩增产物与之杂交,用于同时检测和鉴定食物中毒相关的肠道病原体,该芯片可同时检测15种沙门菌、志贺菌和大肠杆菌的毒力因子。


    细胞粘附试验:传统的细胞粘附试验是检测EIEC的标准方法。方法为在24孔板的孔中圆形玻片上培养的HEP-2细胞单层,生长致50%;待检菌以L肉汤培养,37℃,静止培养16h;每孔加入20ul菌液(含2×107个菌),置37℃,5%CO2温育3h,培养液中含1%α-甲基-D-甘露醇;Hank’s平衡盐溶液洗培养板3次;70%乙醇固定,10%Giema染色,取出圆形玻片,置载玻片上,油镜观察。

 

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