霍乱弧菌——流行病学分型技术

    霍乱弧菌（V.cholerae）污染食品，可引起食源性疾病的暴发。主要表现为剧 烈的呕吐，腹泻，失水，死亡率甚高。属于国际检疫传染病。

    流行病学分型技术： 

    生物型的鉴别

    第Ⅳ组噬菌体（106/毫升）裂解试验：第Ⅳ组霍乱噬菌体常规稀释液（106/毫升）一般只裂解霍乱弧菌古典型，而不裂解埃尔托型（有少数例外）。第Ⅳ组霍乱噬菌体原液（109/毫升）对古典型、埃尔托型均能裂解。 

    多粘菌素B敏感试验：在冷却至约50℃的普通琼脂中加入多粘菌素B（50单位/毫升），混合后制成平板。然后将2-3小时的菌培养物一环接种在平板。然后将2-3小时的菌培养物一环接种在平板表面，待干后置37℃培养过夜，观察结果。古典型敏感（不生长或生长不足10个菌落），埃尔托不敏感（多粘菌株形成菌苔）。也可用多粘菌素B纸片（50单位）按药敏感试验方法进行。

    鸡血球凝集试验：加一滴生理盐水于玻片上，挑取被检菌培养物于盐水中制成浓厚的菌悬液，取一滴2.5%鸡血球悬液混于菌悬液中,摇匀,一分钟内出现血球凝集者为阳性,血球呈均匀分散状态为阴性。埃尔托型为阳性，古典型一般为阴性。

    VP试验：将被检菌接种于葡萄糖磷酸盐蛋白胨水中，于37℃培养2-3天后，取出１毫升加5％α－奈酚酒精溶液0.6毫升，震荡5秒钟，再加入40％氢氧化钾0.2毫升，再震荡5秒钟，于室温中放置2-5分钟，1小时内出现红色者为阳性。古典型为阴性，埃尔托型多为阳性。
    噬菌体、生物分型：为区别埃尔托型的两类不同菌株（流行株与非流行株）和不同菌型，对不同来源的菌株进行分型，可追溯病原的来源。

    噬菌体分型：根据5株噬菌体（VP1-VP5）可将埃尔托弧菌分成32个噬菌体型，常见的流行株为噬菌体1型（对5株噬菌体型全敏感）、3～5型，2型主要是1型的粗糙型，6型以后属非流行株。
    埃尔托弧菌生物分型：根据菌株的溶原性、对溶原噬菌体的敏感性、山梨醇发酵和溶血试验等生物学性状可将埃尔托弧菌分成12个生物型。

    噬菌体－生物分型：将噬菌体分型与生物分型结合起来，每个噬菌体又可分为几个生物型，即噬菌体－生物分型，如1ａ、1ｂ、8ｉ等。常见的流行株为噬菌体1～3型，生物型为ａ～ｄ，非流行株为噬菌体6～32型，生物型为ｇ～ｌ。通过噬菌体－生物分型，可以了解该地区菌型组成和分布情况。

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