细菌的亚硝酸还原实验

       1.硝酸盐还原试验原理：

       硝酸盐还原反应包括两个过程：一是在合成过程中，硝酸盐还原为亚硝酸盐和氨，再由氨转化为氨基酸和细胞内其他含氮化合物；二是在分解代谢过程中，硝酸盐或亚硝酸盐代替氧作为呼吸酶系统中的终末受氢体。能使硝酸盐还原的细菌从硝酸盐中获得氧而形成亚硝酸盐和其他还原性产物。但硝酸盐还原的过程因细菌不同而异，有的细菌仅使硝酸盐还原为亚硝酸盐，如大肠埃希菌；有的细菌则可使其还原为亚硝酸盐和离子态的铵；有的细菌能使硝酸盐或亚硝酸盐还原为氮，如假单胞菌等。硝酸盐还原试验系测定还原过程中所产生的亚硝酸盐。

　　2.培养基：硝酸盐培养基。

　　3.试剂：甲液（对氨基苯磺酸0.8g+5mol／L醋酸100ml；乙液（α-奈胺0.5g + 5mol/L醋酸100ml）。

　　4.方法：被检菌接种于硝酸盐培养基中，于35℃培养1～4d。将甲、乙液等量混合后（约0.1ml）加入培养基内，立即观察结果。

　　5.结果：出现红色为阳性。若加入试剂后无颜色反应，可能是：①硝酸盐没有被还原，试验阴性；②硝酸盐被还原为氨和氮等其他产物而导致假阴性结果，这时应在试管内加入少许锌粉，如出现红色则表明试验确实为阴性。若仍不产生红色，表示试验为假阴性。

　　若要检查是否有氮气产生，可在培养基管内加一小医学教|育网搜集整理倒管，如有气泡产生，表示有氮气生成。

　　6.应用：本试验在细菌鉴定中广泛应用。肠杆菌科细菌均能还原硝酸盐为亚硝酸盐；铜绿假单胞菌、嗜麦芽窄食单胞菌等假单胞菌可产生氮气；有些厌氧菌如韦荣球菌等试验也为阳性。

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