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培养基的配制原则



录入时间:2012-7-27 8:56:25 来源:原创

  
(一)培养基组分应适合微生物的营养特点
即根据不同微生物的营养需要配制不同的培养基。 
         不同营养类型的微生物,其对营养物的需求差异很大。如自养型微生物的培养基完全可以(或应该)由简单的无机物质组成。异养做生物的培养基至少需要含有一种有机物质,但有机物的种类需适应所培养菌的特点。 
       按微生物的主要类群来说,它们所需要的培养基成分也不同: 
                        细菌:      牛肉膏蛋白胨培养基 
                                          LB  (Luria-Bertani) 
                        放线菌:   高氏一号培养基 
                        真菌:      查氏合成培养基 
                                          PDA (Potato-Dextrose-Agar) 
                            酵母菌;   麦芽汁 
当对试验菌营养需求特点不清楚的时候,可以采用‘生长谱’法进行测定。 
(二)营养物的浓度与比例应恰当
●浓度过高——微生物的生长起抑制作用, 
  浓度过小——不能满足微生物生长的需要。 
●碳氮比(C/N)直接影响微生物生长与繁殖及代谢物的形成与积累,故常作为考察培养基组成时的一个重要指标; 
C/N比值= 碳源中的碳原子的mol数/氮源中所含的氮原子的mol数 
例:谷氨酸生产中 
 C/N =4/1时,菌体大量繁殖,谷氨酸积累少; 
C/N=3/1 时,菌体生长受抑制,而谷氨酸大量增加。 
●速效性氮(或碳)源与迟效性氮(或碳)源的比例 
 ●各种金属离子间的比例 
(三)物理化学条件适宜
(1)pH:      各类微生物的最适生长pH值各不相同: 
                     细    菌:7.0~8.0    放线菌:7.5~8.5 
        酵母菌:3.8~6.0    霉    菌:4.0~5.8 
        在微生物的生长和代谢过程中,由于营养物质的利用和代谢产物的形成与积累,培养基的初始pH值会发生改变,为了维持培养基pH值的相对恒定,通常采用下列两种方式: 
内源调节:在培养基里加一些缓冲剂或不溶性的碳酸盐;调节培养基的碳氮比。 
外源调节:按实际需要不断向发酵液流加酸或碱液 
☆磷酸缓冲液:pH值从6.0~7.6之间 
☆加入CaCO3: 
☆培养基中所含氨基酸、肽、蛋白质等物质也可起到缓冲作用。 
(2)渗透压和aw
渗透压     
        等渗溶液    适宜微生物生长 
        高渗溶液    细胞发生质壁分离 
        低渗溶液    细胞吸水膨胀,直至破裂 
大多数微生物适合在等渗的环境下生长,而有的菌如Staphylococcus aureus则能在3mol/L  NaCl的高渗溶液中生长。能在高盐环境(2.8~6.2/L  NaCl)生长的微生物常被称为嗜盐微生物(Halophiles)。 
(3)氧化还原电势(redox poyential)
各种微生物对培养基的氧化还原电势的要求: 
好氧微生物:+0.3~+0.4V,(在>0.1V以上的环境中均能生长).厌氧微生物:只能在+0.1V以下生长 
兼性厌氧微生物:+0.1V以上呼吸、+0.1V以下发酵 

培养基是多氧化还原偶的复杂电化学系统,测出的Eh值仅代表其综合结果。 
对微生物影响最大的是:分子氧和分子氢的浓度 
培养基中常用的还原剂:巯基乙酸、抗坏血酸、硫化氢、半胱氨酸、谷胱甘肽、二硫苏糖醇等。 

 

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