ISO4833-2003菌落计数方法

 一、流程：  
   检样xg/mL+9xml稀释液（磷酸盐缓冲液）→适当十倍稀释样品→选择2~3个连续适宜稀释度→各取1mL分别加入灭菌平皿内（每个稀释度做两个平行）→每皿内加入适量（12~15mL）(如果怀疑样品中含有在培养基表面蔓延生长的菌落，待琼脂凝固后，在其上覆盖一层（4mL）水琼脂)→平板计数琼脂（PCA），30±1 ℃ ，72 ±3 h→菌落计数 

  二、方法：
  
  选择连续2个稀释度不超过300CFU的平板，且一个平板至少含15CFU进行计数，计算公式如下：
     N=∑C/（n1+0.1*n2）*d
  所有平板的菌落数都不足15CFU，计算2平板菌落的算术平均值m，液体样品：NE=m
                       固体样品： NE=m×d-1
  无菌生长：液体样品：less than 1;     固体样品：less than 1 ×d-1
最终结果保留前两位有效数字。

三、菌落总数测定几点说明：
    由于检样中采用30/35℃有氧条件下培养，因而并不是样品中实际的总活菌数，一些特殊营养要求的细菌、厌氧菌、微需氧菌、以及非嗜中温细菌，均难以反映出来。
鉴于食品检样中的细菌细胞是以单个、成双、链状、葡萄状或成堆的形式存在，因而在平板上出现的菌落可以来源于细胞块，也可以来源于单个细胞，因而平板上所得菌落的数字不应报告活菌数，而应以单位重量、容积或表面积内的菌落数或菌落形成单位（colony forming units，CFU）报告。

 

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