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荧光定量PCR
录入时间:2013-5-13 9:18:55 来源:海博生物
概述
荧光定量PCR
是( realtime fluores-cence quantitative PCR,RTFQ PCR) 是1996 年由美国Applied Biosystems 公司推出的一种新定量试验技术,它是通过荧光染料或荧光标记的特异性的探针,对PCR产物进行标记跟踪,实时在线监控反应过程,结合相应的
软件
可以对产物进行分析,计算待测样品模板的初始浓度。
原理
PCR扩增时在加入一对引物的同时加入一个特异性的
荧光探针
,该探针为一寡核苷酸,两端分别标记一个报告荧光基团和一个
淬灭
荧光基团。探针完整时,报告基团发射的荧光信号被
淬灭
基团吸收;刚开始时, 探针结合在DNA任意一条单链上;
PCR扩增
时,Taq酶的5’端-3’端
外切酶
活性将探针酶切降解,使报告荧光基团和淬灭荧光基团分离,从而荧光监测系统可接收到荧光信号,即每扩增一条DNA链,就有一个
荧光分子
形成,实现了荧光信号的累积与PCR产物形成完全同步。
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