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毕赤酵母


录入时间:2013-7-16 9:34:56 来源:百度百科

巴斯德毕赤酵母,是甲醇营养型酵母中的一类能够利用甲醇作为唯一碳源和能源的酵母菌。与其它酵母一样,在无性生长期主要以单倍体形式存在,当环境营养限制时,常诱导2个生理类型不同的接合型单倍体细胞交配,融合成双倍体。
巴斯德毕赤酵母的另一个生物学特点是,甲醇代谢所需的醇氧化酶被分选到过氧化物酶体中,形成区域化。以葡萄糖作碳源时,菌体中只有1个或很少几个小的过氧化物酶体,而以甲醇作碳源时,过氧化物酶体几乎占到整个细胞体积的80%,AOX增至细胞总蛋白的35%-40%。因此,当在AOX基因前利用同源重组方式插入外源蛋白基因时,可获得大量表达。同时,根据甲醇酵母这种可以形成过氧化物酶体的特性,既可利用该系统表达一些毒性蛋白和易被降解的酶类,也可用以研究细胞特异区域化的生物发生及其机制和功能,为高等动物类似的研究提供启示。
开发利用 

Koichi Ogata等人于1969年首次发现了某些酵母可以利用甲醇为唯一碳源和能源生长(Ogata, et a1.1969 ),此后,用甲醇利用型酵母生产单细胞蛋白作为动物饲料的潜力就引起了广泛关注。1987年,Cregg等人首次报道了用甲醇营养型酵母表达乙型肝炎表面抗原(HbsAg随后Philip Petroleum公司与Salk Institute Biotechnology/Industrial Associates(SIBIA)就开始了毕赤酵母表达系统的合作开发。SIBIA.的研究人员分离了AOX基因的启动子和宿主菌株,构建了载体,并开发出了相应的毕赤酵母基因操作技术,结合Philip Petroleum公司生产单细胞蛋白的发酵工艺,实现了外源蛋白的高效表达。1993年,Philip Petroleum公司将毕赤酵母表达系统的专利卖给Research Corporation Technologies公司,并委托Invitrogea公司进行有关产品销售。
优缺点 

Pichia.pastoris酵母菌体内无天然质粒,所以表达载体需与宿主染色体发生同源重组,将外源基因表达框架整合于染色体中以实现外源基因的表达。包括启动子、外源基因克隆位点、终止序列、筛选标记等。表达载体都是穿梭质粒,先在大肠杆菌复制扩增,然后被导入宿主酵母细胞。为使产物分泌胞外,表达载体还需带有信号肽序列。
多拷贝 

与复制的质粒型表达载体不同,整合型表达载体的拷贝数可以有很大的变化。含多拷贝外源基因的表达菌株合成蛋白的量也较多。体内整合可通过高遗传霉素抗性,筛选可能的多拷贝插入;而体外整合可通过连接产生外源基因的串联插入。多拷贝表达菌株的获得方式有两种:一种是利用SDS-PAGE电泳、免疫杂交或菌落点杂交方法在大量的转化子中进行自然筛选。得到产量高的表达菌株。另一种在转化前将多个表达盒拷贝插入到单个载体中,而后再通过交换整合到受体染色体上。
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