将待存菌分纯后，用准备好的保护剂牛奶洗下菌苔，把菌悬液滴入菌种管后，在管口抽取少许棉花塞入管内细颈处，放入冰箱－40℃速冻40min，放入准备好的混有盐的冰中，接上真空泵，真空抽干呈粉末状，火焰封口医学教育|网搜集整理，贴上标签，保存于－40℃冰箱。此法保存时间长，可达15年，不易变性，但需要专用仪器，一般实验室难以配备，而且过程复杂，操作难度大，需要较长时间才能完成。所以此方法适合具有条件的实验室菌种的长期保存。
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