组织和细胞的固定方法

 

固定方法有物理固定和化学固定两类，物理固定可采用空气干燥（血涂片）、骤冷（在液氮中迅速冷冻）或微波固定等；化学固定有浸润法（immersion method）和灌流法（perfusion method）。灌流法适用于动物实验中对缺氧敏感的器官，如神经系统和胃肠等取材。

 

一、浸润法

 

浸润法是组织化学和免疫 组织化学常用的固定方法，一次要处理许多组织样品时也多用此法。

 

预先需估计固定剂的用量，并在取材前配好固定液，分装于小容器内，在容器上标记组别和取材时间。容器内放人记录组织类型的纸条，以便包埋时辨认。固定液的用量应是样品的40倍，以保证组织充分固定。固定时间可根据所选固定液和组织类型而定。

 

若进行酶组织化学染色，应在4℃短时间固定，固定时间长会导致酶活性减弱，甚至消失。

 

二、灌流固定法

 

此法是经血管途径，将固定液灌注到欲固定的器官内，使生活的细胞在原位及时迅速固定，取下组织之后再浸入相同的固定液内继续固定。

 

灌流固定时大动物多采用输液方式，将固定液从一侧颈总动脉或股动脉输入，从另一侧切开静脉放血，输入固定液与放血同时进行。固定液的输人量因个体不同而异，即500―2000ml不等。

 

小动物多采用心脏主动脉灌流，如大鼠和小鼠，在吸人 深度麻醉情况下，打开胸腔，纵向切开心包膜，并用纱线在动脉弓下打一松结，然后用静脉输液针从左心室向主动脉方向刺人，针尖刺人后，随即将纱线扎紧固定，勿使其移动，再将右心耳剪开放血。在灌注固定液前，先用含抗凝剂的37℃生理盐水灌流，冲洗血管内的血液，防止血液凝固阻塞血管。抗凝剂常用肝素，剂量为40mg/L冲洗液。肝脏颜色由鲜红变为浅白色时，即可灌流固定液，灌注速度为5～10ml/min，应在30分钟内结束灌注并取材，而后将组织浸入相同的固定液中1～3小时。灌流固定对组织结构和酶活性保存较好。