常用生化试剂作用
录入时间:2013-9-13 9:46:29
来源：食品伙伴网
1.蛋白酶K：能水解消化蛋白质，特别是与DNA结合的组蛋白。再尿素和SDS中稳定。一般工作浓度是50—100μg/ml，推荐反应缓冲液：50mM Tris-HCl (pH7.5),10mM CaCl2。2.SDS:十二烷基硫酸钠. 溶解细胞膜上的脂类与蛋白质，因而溶解膜蛋白而破坏细胞膜，并解离细胞中的核蛋白，SDS 还能与蛋白质结合而沉淀3.IPTG 异丙基-β-D-硫代半乳糖苷, 常用于蓝白斑筛选及IPTG诱导的细菌内的蛋白表达等. IPTG和乳糖的结构相似，所以它和乳糖一样，可以与乳糖操纵元的阻遏蛋白结合，使阻遏蛋白的空间构像变化，四聚体解聚成单体，失去与操纵子特异性结合的能力，从而解除了阻遏蛋白的作用，使其后的基因得以转录合成利用乳糖的酶类。与乳糖不同的是，IPTG不被 β-半乳糖苷酶水解。常与X-GAL一起用于蓝白斑筛选。作用极强的诱导剂,不被细菌代谢而十分稳定4.X-gal5-溴-4-氯-3-吲哚-β-D-半乳糖苷，是IPTG的显色试剂，在IPTG的催化下显蓝色。常跟IPTG一起用与蓝白斑筛选。5.G418: 一种抗生素，对几乎所有的细胞都有毒性，是稳定转染最常用的选择试剂。当neo基因被整合进真核细胞基因组合适的地方后 ,则能启动neo基因编码的序列转录为mRNA,从而获得抗性产物氨基糖苷磷酸转移酶的高效表达 ,使细胞获得抗性而能在含有Ｇ418的选择性培养基中生长。Ｇ418的这一选择特性 ,已在基因转移、基因敲除、抗性筛选以及转基因动物等方面得以广泛应用。6.DMSO 二甲基亚砜.实验室常用于作液体层析溶剂，同时用作测试物质紫外消光值上时用作参照物.能溶于所有烷烃和烯烃。7.曲拉通X-100TritonX-100.用的细胞裂解液成分之一，在保护蛋白活性方面有一定作用. 能力介于NP40和SDS之间，偏向于NP408.NP-40 很温和的去垢剂，1%浓度的基本可以破坏掉胞膜，而对核膜破坏的作用弱，结合特定的buffer可以获得胞浆蛋白。9、BSA牛血清白蛋白. 主要起维持渗透压作用、PH缓冲作用、载体作用和营养作用。在动物细胞无血清培养中，添加白蛋白可起到生理和机械保护作用和载体作用。常用于蛋白定量中的内参和抗体稀释液。10.甲酰胺 甲酰胺被用作凝胶电泳中RNA的稳定剂，也用于稳定毛细管电泳中的变性单股DNA。 11.TEMED 四甲基乙二胺。促凝剂。在中性及碱性pH条件下，加入TEMED可加速凝胶聚合12.巯基乙醇 一种强还原剂。可还原蛋白二硫键，从而使蛋白保持溶解状态，有利于与SDS的结合。使蛋白解离成单个亚基。13.甲叉双丙烯酰胺N，N'-甲叉双丙烯酰胺，别名MBA，又叫亚甲基双丙烯酰胺，次甲基双丙烯酰胺，N，N'-甲撑双丙烯酰胺。作交联剂与丙烯酰胺聚合而制备聚丙烯酰胺凝胶。14.过硫酸铵 过硫酸铵（APS）的作用主要是提供自由基，然后在促凝剂TEMED的作用下使丙烯酰胺及甲叉丙烯酰胺聚合。15.B27 一种添加剂，用于神经肝细胞培养，被认为具有抑制胶质细胞生长的作用。16.DTT 二硫苏糖醇，常用还原剂，既有抗氧化作用。它能保护酶分子上的还原性基团，维持还原性环境，稳定酶的活性。又是一种蛋白质变性剂，破坏二硫键，浓度不同，起到的作用也不同。17.弗氏不完全佐剂和弗氏完全佐剂 弗氏完全佐剂是一种油包水的乳浊液，含结核分枝杆菌的细胞壁成分。佐剂活性来自于油滴中免疫原的持续释放，并刺激局部免疫反应。弗氏不完全佐剂用于初次免疫刺激。为了减少副作用，不含结核分枝杆菌成分的弗氏不完全佐剂用于加强免 氏完全佐剂是一种油包水的乳浊液，能够非常有效的诱导产生高滴度的抗体。弗氏完全佐剂含结核分枝杆菌的细胞壁成分，可以加强对抗原的抗体反应。佐剂活性来自于油滴中免疫原的持续释放，并刺激局部免疫反应。18.吐温 20Tween-20 ，常用的非离子去垢剂。19.吐温 80Tweenum 80 ，除作乳化剂外，也用作某些水中难溶药物的增溶剂。20. 十二烷基肌氨酸钠 脱细胞试剂，制备脱细胞组织工程支架材料21.PVPPPVPP对片剂具有崩解作用，能和各种不溶于水的药物共容，能稳定化各种悬浮剂，又具有形成络合物的能力以及吸附作用等，因而可用作医药助剂。也用于除去啤酒中的多酚。22.PIPES哌嗪-N，N'-二(2-乙磺酸）,实验室做缓冲剂用。全名是哌嗪-N,N-二(2-乙磺酸)，pKa是6.80。不参与也不干扰生物化学反应，价格比较贵。常用在免疫和细胞类的实验中，PIPES有时还被用来制备大肠杆菌感受态。23.CTAB 十六烷基三乙基溴化铵，一种去污剂，可溶解细胞膜，它能与核酸形成复合物，在高盐溶液中（（0.7 mol/L NaCl）是可溶的，当降低溶液盐浓度到一定程度（0.3 mol/L NaCl）时，从溶液中沉淀，通过离心就可将CTAB-核酸的复合物与蛋白，多糖类物质分开。最后通过乙醇或异丙醇沉淀DNA，而CTAB溶于乙醇或异丙醇而除去。CTAB法是现在实验室最常用的一种提取核酸的手段。24。HEPES 羟乙基哌秦乙硫磺酸,一种弱酸缓冲剂，主要作用是防止培养基pH迅速变化。在开放式培养条件下，培养基脱离了5%CO2的环境，CO2气体迅速逸出，pH迅速升高，若加了HEPES，此时可以维持pH7.0左右。一般在进行克隆化培养时要添加HEPES25．MOPS 一种缓冲液，有抑制RNA酶的作用，一般和甲醛（用于变形RNA）用于RNA变性电泳26。盐酸胍 盐酸胍等可使蛋白质结构中的氢键发生断裂，这增加了非极性分子包括氨基酸侧链的溶解度，减少了疏水相互作用。27。PMSFPhenylmethanesulfonyl fluoride，中文名为苯甲基磺酰氟。用于抑制蛋白酶. PMSF严重损害呼吸道粘膜、眼睛及皮肤，吸入、吞进或通过皮肤吸收后有致命危险。一旦眼睛或皮肤接触了PMSF，应立即用大量水冲洗之。凡被PMSF污染的衣物应予丢弃。PMSF在水溶液中不稳定。应在使用前从贮存液中现用现加于裂解缓冲液中。PMSF在水溶液中的活性丧失速率随pH值的升高而加快，且25℃的失活速率高于4℃。pH值为8.0时，20μmmol/l PMSF水溶液的半寿期大约为85min，这表明将PMSF溶液调节 为碱性（pH>8.6）并在室温放置数小时后，可安全地予以丢弃。 28．溴酚蓝pH指示剂，pH=3.0时呈黄色，pH=4.6时呈蓝紫色。酸碱指示剂；非水滴定用指示剂，蛋白电泳染色；病毒化验等。29。台盼兰台盼蓝（Trypan Blue)或称台盼兰，是细胞活性染料，常用于检测细胞膜的完整性30。二甲苯青FF用于琼脂糖聚丙烯酰胺凝胶电泳的示踪染料, 易溶于水和醇，可与溴芬蓝按照一定比例配置loading buffer31。吖啶橙是一种荧光色素，与细胞中DNA和RNA结合量存在差别，可发出不同颜色的荧光，与DNA结合量少发绿色荧光，与RNA结合量多发桔黄色或桔红色荧光。该染料具有膜通透性，能透过细胞膜，使核DNA和RNA染色。在荧光显微镜下观察，吖啶橙可透过正常细胞膜，使细胞核呈绿色或黄绿色均匀荧光；而在凋亡细胞中，因染色质固缩或断裂为大小不等的片断，形成凋亡小体。吖啶橙使其染上致密浓染的黄绿色荧光，或黄绿色碎片颗粒；而坏死细胞黄荧光减弱甚至消失。吖啶橙AO常与溴化乙啶EB合用双染，因EB只染死细胞使之产生桔黄色荧光，由此可区分出正常细胞、凋亡细胞及坏死细胞.它还可以用作移码突变的诱变剂,能镶嵌于两个相邻的碱基对之间，这样在DNA复制过程中，会使DNA链增加或缺失一个碱基，造成移码突变。吖啶橙染液有毒，操作时要戴手套，需避光。32。EDTA和EGTAEDTA--乙二胺四乙酸EDTA是螯合剂的代表性物质。能和碱金属、稀土元素和过渡金属等形成稳定的水溶性络合物。此外EDTA也可用来使有害放射性金属从人体中迅速排泄起到解毒作用。也是水的处理剂。EGTA--乙二醇双(2-氨基乙基)四乙酸在.Mg2+存在下测定Ca2+时,可用EGTA直接滴定,滴定误差小于0.3% ,比用EDTA滴定提高了选择性..此外它与金属离子形成的配合物的稳定性普遍比相应的EDTA配合物差。33.TRICINEN-[三（羟甲基）甲基]甘氨酸, 常见的电泳系统是Tris－甘氨酸系统；Tris－Tricine电泳则用于分子量小于10kDa的多肽和蛋白的电泳,能够获得较好的分离效果. 可以用前者代替。34、PVP40PVP40 中的CO - N = 有很强的结合酚类化合物的能力, 与其形成稳定的复合物, 常用于提取RNA时除去酚类。35、脱氧胆酸钠离子型去垢剂，作用有：1、裂解细胞；2、溶解蛋白，尤其是可以溶解一些难溶于水的蛋白，如膜蛋白等；3、很适合做WB，但在Co-IP中使用，需要谨慎36、6-BA细胞培养中用到，细胞分裂素。37、碘代乙酰胺也叫作碘乙酰胺,2-碘乙酰胺. 用于有机合成，在蛋白组学中组氨酸和半胱氨酸的烷基化试剂，用于多肽测序以及酶抑制剂等，蛋白组学级试剂38、萘乙酸NAA,为广谱性植物生长调节剂,可促进细胞分裂,诱导形成不定根,改变雌雄花比例,增加坐果率等39、番红O藏红T；氧化还原指示剂；生物染色；酸碱指示剂；滴定分析亚硝酸盐。40、TTC2，3，5-三苯基氯化四氮唑(红四氮唑),多用于药物分析和琼脂糖添加剂，在计数琼脂中加入适量的TTC(0.5% TTC 1ML加到100ML琼脂中)，细菌菌落长成红颜色,，对去除食品本底颗粒物干扰非常有意义。
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