(1)涂片：取一块干净的载玻片,并在其中央滴一小滴生理盐水(或无菌蒸馏水)。接种环在酒精灯上杀菌后从斜面挑取少量菌种(金黄色葡萄球菌或枯草杆菌)与玻片上的水滴混匀后,涂布成一均匀的薄层。涂布面一般以直径1cm大小范围为宜。 (2)干燥与固定：涂片最好在室温下使其自然干燥。亦可在酒精灯上微微加热,加速水分蒸发,但切勿过热。固定时,在酒精灯火焰外层尽快地来回通过2~3次,多为2~3s,以载玻片背面不觉烫手为宜,放置待冷后,进行染色。
(3)染色：在涂片上滴染色液一滴,使染色液覆盖涂片,染色约1min。
(4)水洗：斜置载玻片,在来自水龙头下用小股水线冲洗,直至洗下的水呈无色为止。
(5)干燥：用吸水纸吸去涂片边缘的水珠,置室温下自然干燥或微微加热,以加快干燥速度。注意用吸水纸时切勿将菌体擦掉。
(6)镜检：用显微镜观察,并用铅笔绘出细菌形态图。
2. 革兰氏染色法：革兰氏染色反应是细菌分类和鉴定的重要性状。
革兰氏染色是一种复染色法(由两种或多种染料染色的方法,称复染色法,又叫鉴别染色法)。
革兰氏染色法(Gram stain)不仅能观察到细菌的形态而且还可将所有细菌区分为两大类:染色反应呈蓝紫色的称为革兰氏阳性细菌,用G+表示;染色反应呈红色(复染颜色)的称为革兰氏阴性细菌,用G¯表示。
革兰氏染色需要的试剂主要有草酸铵结晶紫染液、碘液、石炭酸复红染液、95%乙醇、番红染液、香柏油、二甲苯。 • 染色流程：制片→干燥→固定→初染→水洗→媒染→水洗→脱色→水洗→复染→水洗→干燥→观察
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