指通过利用生物化学的方法来测定微生物的代谢产物、代谢方式和条件等来鉴别细菌的类别、属种的试验。
生化试验或称生化反应：细菌的酶不完全相同，对营养物质的分解能力不一致，因此其代谢产物各异。在培养基中加入可与被测终产物反应的指示剂，产生肉眼可见的变化，如颜色的改变等，利用生化方法来鉴定细菌的试验，统称为细菌的生化试验或称生化反应 （二）生化试验的方法：
1在培养物中加入某种底物与指示剂,经接种、培养后,观察培养基的pH值变化。 2在培养物中加入试剂，观察它们同细菌代谢产物所生成的颜色反应。 3根据酶作用的反应特性，测定酶的存在。
4根据细菌对理化条件和药品的敏感性，观察细菌的生长情况。 （三）生化试验的注意事项
1. 待检菌应是新鲜培养物，培养18~24h。 2. 待检菌应是纯种培养物。
3. 遵守观察反应的时间。观察结果的时间，多为24或48小时。 4. 应做必要的对照试验。
5. 提高阳性检出率，至少挑取2~3待检的疑似菌落分别进行试验。 （四） 检验细菌的生化试验范围
:1、糖（醇）类代谢试验 2、氨基酸和蛋白质代谢试验
3、有机酸盐和铵盐的利用试验 4、呼吸酶类试验 5、毒性酶类试验
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