产气荚膜梭状芽孢杆菌的菌落计数法

用有利于梭状芽孢杆菌恢复的培养基作为稀释液，制备待测食品的系列稀释液。用 无卵黄胰蛋白胨亚硫酸铁柠檬酸盐杯丝氨酸琼脂Shahidi和Ferguson多黏菌素卡那霉素亚硫酸盐琼脂或 新莓素血琼脂对系列稀释物进行平板计数。对于SICA和 SFA琼脂,既可采用加人lmL稀释液后倒平板的方法（lOmL培养基），也可在预先干燥 或倒好的平板上进行表面接种。新霉素血琼脂平板应预先倒好平板，干燥后进行表面接种。所有平板在35℃或37℃：厌氧培养24h在MCA和SFA琼脂上，可疑产气荚膜梭状芽孢杆菌的菌落延黑色的（亚硫酸盐还原 产生硫化铁沉淀)。在新霉素血(牛、马或人血)琼脂上，产气荚膜梭状芽孢杆菌的菌落产生-圏狭窄的完全溶血带（形成毒素），在溶血带外又形成一圏狭窄的非完全溶血带挑选可疑的产气荚膜梭状芽孢杆搿菌落，穿刺接种至含有0.3%琼脂的硝酸盐蛋白 胨水试管，也可以在Willis乳糖卵黄牛乳琼脂上划线接 种,预先将几滴产气荚膜梭状芽孢杆繭的抗毐岽喷洒每个平板的一半，干燥 后，在整个平板上划线接种。还可以将可疑菡落在血琼脂平板上划线。
将硝酸盐琼脂试管及Willis和fiobbs培养基置37℃厌氧培养24h。血琼脂平板置 于37℃需氧培养24h培养后，观察硝酸盐琼脂中菌体的生长情况(指菌体运动），并测试 硝酸盐的还原量选取Willis/Hobbs培养基上生长的菌株进行革兰氏染色后 镜检。产气荚膜梭状芽孢杆菌为革兰氏染色阳性、不运动杆菌,并能还原硝酸盐。通过以 下实验进行验证:①观察WmWHobbs培养基上的菌落——产气荚膜梭状芽孢杆菌在平 板无抗毒素的部分，菌落周围有一圈雾状带，在有抗毒素的区域不形成雾状带。另外该菌可发酵乳糖②在血琼脂需氧培养时，该菌不生长。

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