倾倒平皿法

 选用适当的培养基并在适当的培养条件下时以对样品中的活菌或菌落（如菌落形成 单位)计数。水溶性或可在水中制成悬浮液的®体样品（如土样、面粉、奶粉、糖），可以在 称取样品后，加入无菌水配制成稀释液，并按以下介绍的方法计数;有些固体物质(包括一些食品，如奶酪、肉等)需要在无菌水中浸泡后得到悬浮液一般使用的稀释 液包括蛋白胨水稀释液，蛋白胨盐稀释液和25%的Ringer氏溶液。

在平皿屮加人已知量的悬浮液或其稀释液，倒入融化的琼脂。琼脂凝固置于温箱中培养后计数。应该选择平板菌落数小于300的平板计数。需要时可以采用双平行或三平 行平板。

下面介绍关丁液体样品的标准计数方法。对于不同的物质或产品，操作步骤有所不同。

样品的混合

在进一步检测前，必须将样品充分混匀。对于液体样品，如果瓶中的液体没有完全充满，可以在30cm的范围内振动瓶子25次混匀。如果样品的瓶子是满的，快速将瓶子翻 转M次彻底浞匀,然后倒出约1/4的内容物，再按上述方法摇动25次。

稀释液的制备

(1)       取一支lmL的吹吸移液管T将移液管的尖部垂直插人样品液面下不到3cm的位 置，采用安全移液方式，吸取到lmL刻度后吹掉，反复1U次。吸取lniL液体，移液管尖 贴仵瓶颈，使管外壁的液体流下。将移液管置于第一管稀释液中，移液管尖部靠在试管内壁，稀释液液面以h 2〜处，让移液管中的液体流出，移液管不能接触稀释液，将移液管静置知，使残余的液滴全部流出，并用吹吸球轻轻吹出管内液体。用完的移液管放入 装有灭菌液的容器中^第一个试管标记为1/10或1CT、

(2)       取一只新的移液管，放人第一个稀释度的试管屮，吸取到约lmL的刻度后放出， 反复吹吸10次使内容物混匀(或在手中转动试管）。试管的尖部不要低于液面2〜3cm。 然后移取丨mL稀释液到第二管稀释液中，如上所述，使移液管中液体流出。同样，如上步 所述，移液管放人装有灭阑液的容器屮。并标记稀释试管为1/】00或10_2。

(3)       取另一只新的吸管和稀释管，采用同样的方法稀释到1/1000或10人

(4)       根据预测样品中可能存在的细菌数，采用相同的操作步骤可以进一步稀释到 10 4、川_5等需要的稀释度。假定按多数细菌的体积大于l^m3计箅，则细菌团的计数不 可能大于1012/mL。腐败的肉类表面的细菌数约为lOVcm2，河水的细菌数约为104〜 106/mL。

平板的制备

(2)                                         使用同一支吸管从10 2稀释度的试管中吸取lmL稀释液移取到平板中，注意 在移取前先吹吸液体3次清洗移液管内部并将稀释液混匀。

(3)                               同样的方法从10     —和原液中移取lmL液体到平皿中：

(4)       另外一种更快的方法是在稀释的同时移取溶液。即通过吹吸10次将液体混匀 后，移取lmL液体到平皿中，然后再移取lmL到另一个有稀释液的试管中。

倒平板

(1)   每个平板中加人10mL融化的琼脂培养基并迅速往复摇动和转圈晃动5〜l(hs 使培养基与接种物充分混合。严格的操作方法是往复摇动5次，顺时针转动5次，与第一 次运动方叼垂直摇动5次，逆时针转动5次。用这种方法能保证样品充分分散，操作时注 意不要让琼脂溅到平皿的盖上。

注意：从稀释样品至倒培养基的时间不能超过30min(—般为15〜30min)，因为长时 问放置可能会造成稀释液中悬浮的细菌死亡、增长或菌落的分离。

(2)   待平板冷却,翻转后置于适当的温度培养。注意平皿的标识必须正确。花点时 间研究如何标识平皿很有必要。使用代码标识可以避免混淆，但过多的书写标记会浪费时间，可以使用不同颜色的记号笔以减少e录。为r尽快达到温度平衡,在培养箱屮叠放 的平板不能起过六个。

注意：在整个操作过程中要避免污染。移液管使用前快速通过酒精灯外焰灼烧；样 品瓶或试管在拿掉塞子及重新盖上前，都要将W部在火焰上灼烧；平皿盖开口尽量小，只 要能倒人培养基即可；倒琼脂培养基前，将瓶壁或试管壁擦干；拿掉塞子后（或在再次盖上 瓶塞之前)要灼烧瓶颈部。

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