沉淀素试验

录入时间:2013-12-19 10:04:42 来源：海博生物

Lancefield方法中链球菌族抗原溶液的制备

(1) 在50mL酵母葡萄糖Lemco肉汤培养基中接种链球菌，过夜培养；

(2)将肉汤培养基离心，弃去上清液;.

(3) 在细菌沉淀中加人2mL(0.05mol/L的,含有8.5g/LNaCl的HC1溶液，用移液管将悬浮液转移到小试管中；

(4) 将试管在沸水浴中加热l0min

(5) 用流水冷却；

(6) 滴加1滴0.04%的酚红，液体应由红变黄；

(7) 逐滴加人0.3mol/L NaOH溶液至液体呈碱性（出现红色），然后再逐滴加入0.lmol/L HCl直至液体呈中性(颜色为鲑粉色）；

(8)离心用巴斯德移液管转移上清液至另一试管中，弃去沉淀，该上清液包含有需要使用的抗原，如果抗原提取液需要保存，可加人0.5%的石炭酸，并存放于冰箱中。

13.6.2沉淀环试验

该试验为沉淀素试验中最常用的方法，通常用来检测链球菌。用1:10〜1:107的抗原10倍稀释液可以进行粗略定量试验。

操作步骤

(1) 在6mm*50mm试管中加入O.lmL抗体：

(2) 在抗体上加人0.1mL已制备好的抗原或系列抗原稀释液。小心操作，以使两溶液之间形成清晰的界面。用微量巴斯德移液管，将管口正好抵住抗体表面上部的试管壁，以使抗原溶液流向抗体表面；

(3) 以同样方式做盐水-抗血清对照和抗原-阳性血清对照。

(4) 结果：30min内试剂界面出现白色沉淀,即为阳性反应。

若实验经费较少，需减少试剂用量，可以用毛细管代替6_x 50mm试管，毛细管可以垂直插人橡皮泥中。

如果用系列抗原稀释液做沉淀素试验,通常会有一根试管比所有其他试管的沉淀出现的都早，那么这根试管抗原对抗体的稀释比例为最佳比例。