试管法测定非产孢菌的D值和Z值

⑴将24h的肉汤培养物(如大肠杆茵的)稀释至3x l08mL(可以使用显微镜计数 法,或经显微镜计数校准的比浊剂或浊度管）。

(2)取10mL上述稀释液加入至90mL无菌稀释液中（如0.1%蛋白胨溶液）,加入数 粒玻璃珠，充分振荡混合打碎菌落D各取5mL分装到5个无菌的测试管 中(用聚丙乙醇密封试管效果更好、

(3)将操作步骤2制备的试管放入58℃水浴中，同时放入一个装有5mL稀释液和温 度计的测试管，当温度测试管中的温度值比水浴温度低It：时取出1支试管，间时开始 计时。 ’

(4)很快将取出的试管转移到冷水中，准备6个稀释度,并用所有的稀释度进行平板 计数。

(5)分别于Z.SmLnJ.SmiiulOmin取出1支试管，重复第4步操作

(6)将平板放人培养箱培养，检测不同加热时间段存活的菌体数,做loglt((存活的菌 数)/时间图，从图中找出最佳直线斜率的倒数作为值(以min计)。

(7)按下列水浴温度和分段计数时间，重复(1)〜（6)的操作步骤D

56℃ 0,10min,20niLn,30min,40min 和 50min

54℃ 0,10min,20min,30mLn,40min 和 50min

52℃ 0,20min,35min,50min,65rnin 和 80min

51℃ 0 ’ 20min，40min，60min，8Omin 和 1OOmin

50℃ 0,20min,40min,60min,80min 和 lOOmin

(8)以log₁₀D_T和T为坐标做图，并估计z值。

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