大肠菌群、粪大肠菌群和大肠杆菌的多管技术计数

根据是否分解乳糖产酸产气可以检测下文介绍的培养基中是否存在大肠菌类细菌。 但因为许多食品中含有大量其他的碳水化合物(如蔗糖、葡萄糖和果糖），当高浓度的食品 混人培养基后，培养时可能会出现假阳性结果，这一点应引起重视。

培养温度是一个有争议的问题，一般使用30〜37t，但在这一温度范围内，培养温度 越低，计数结果越髙。

1月桂基硫酸盐胰蛋白胨肉汤在30℃或35℃或37℃培养（ISO4831:1991)

无菌移取lmL均质好的样品悬液加人盛有月桂基硫酸盐胰蛋白胨肉汤 的试管中,共移取3~5管。检测低污染食品时，取10mL或100mL最低稀释度的样品悬 液加到等体积的培养基中，每个稀释度需加3管或5管。

分别在30℃（或37℃）培养，24h和48h后检查生长和产气情况(产酸的情况通 过加在试管中的pH指示剂进行检测。当发酵管产酸且产生足够的气体时(即发酵管液 面与外管液而平行），即为“可疑阳性”反应。可疑阳性结果还包栝发酵管产生少量的气 体，但带盖试管液而上有气泡冒出的情况。在常规检测中，试管产气即可判定为阳性结 果，而不再需要检查产酸情况。

可疑阳性管需要转接2 — 3环接种物到亮绿乳糖胆盐肉汤中进行确认。将转接试管 在35℃继续培养48h产气(判断标准如上)者即为阳性结果。比较每一梯度的阳性管和 阴性管数，通过最近似值表查得可疑大肠菌群和最终确认后大肠菌群的数值。

从可疑阳性管中转接培养物到EC培养基中，在(45.5 ±0.2)℃培养，可检测粪大肠 菌群

.2亮绿乳糖胆盐肉汤

也可用多管技术法替代上述方法进行大肠菌群的检验：即接种亮绿乳糖胆盐肉汤 试管，在30℃（BS4285：3.7,1987）35℃或37℃培养，通过产气来判定可疑阳 性结果。用接种环将产气管中的培养物划线转接到Endo琼脂平板、紫红旭盐乳糖琼脂平板或麦康凯琼脂平板上，可验证阳性结杲。

3麦康凯肉汤

另一种方法是用样品稀释液接种麦康凯肉汤后，在30℃培养48h(大肠产 气菌计数)或37℃培养48h(大肠菌群计数)。可疑阳性管(产酸、产气)转接到亮绿乳糖胆盐 肉汤中或在麦康凯琼脂平板上划线进行验证。

从可疑阳性管转接接种物到亮绿乳糖胆盐肉汤中，并在(44±0.1)℃培养，可检测粪 大肠菌群

4粪大肠菌群和大肠杆菌的多管技术计数法

大肠菌群的验证结果能够为粪大肠菌群的计数提供补充信息，粪大肠菌群可在44- 45℃分解乳糖产酸产气（大多数情况下，把它等效于大肠杆菌）。这个实验被称作改良 Eijkman 试验 0

可疑阳性管接种物可转接到以下任一培养基中：

(1) EC 培养基，在 44.5℃培养24h(AOAO,1995

(2) 亮绿乳糖胆盐肉汤，在(44.0±0.1)℃培养24h

在改良的Eijkman试验中通常建议将月桂基硫酸盐胰蛋白胨肉汤和麦康 凯肉汤综合起来使用。转接前试管应先将培养基加热到培养 源度（这个试验以前是用麦康凯肉汤在44~45℃培养、现在已被上面列出的两种培养基 代替了）。

I型大肠杆歯在44~45℃下为吲哚试验阳性，因此Eijkman试验可将转接的蛋白胨 水试管在较高温度培养24h，然后检测吲哚的产生。大肠杆菌的验证实验 IMViC(即吲哚试验、甲基红试验、V-P试验和柠檬酸盐利用试验）比较费时间：因为细菌 要在35~37℃培养，苜先必须先将适当的肉汤培养物在固体培养基（该培养基有特异性 但没有选择性)上划线，以获得纯菌种。

另一种速度更快的大肠杆菌计数方法是将原始样品和稀释液转接到培养基中，在 30℃培养4h，然后转移到(44,0±0.2)℃水浴巾培养18-20h:

注意：正如前文所述,大肠杆菌中的一些致病菌株(特别是EIEC和VTEC菌株）这 些试验呈阴性。

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