单染色与革兰氏染色步骤

单染色

将热固定的涂片放在有水槽的染色架上，用Loeffler亚甲基蓝溶液染色5min，轻轻淋 洗玻片，用干净的吸纸或滤纸吸干。

革兰氏染色

这是一种复染方法，是对多数细菌进行初步鉴定的基本方法。在该方法中，先用结晶 紫对涂片染色用碘液媒染,然后用乙醇、丙酮或乙醇和丙酮的复合液脱色，这一步能脱 掉革兰氏阴性菌体中的紫色，但却不能使革兰氏阳性阐脱色，最后用沙黄染液复染，将革 兰氏阴性菌染成橘红色。

用这种染色方法对以将细菌分成两类：

(1) 革兰氏阳性菌这类菌不能用乙醇脱色，呈现紫色，如链球菌、芽孢菌等。

(2) 革兰氏阴性歯在显微镜下呈现粉色，如假单胞菌、大肠杆菌等。

注意：使用菌龄较短的菌株(18~24h)进行革兰氏染色或采用包括幼龄菌在内的各 种菌龄的菌株做涂片时，因为一些菌株随菌龄的变化在革兰氏染色反应和形态学上会发 生变化：

革兰氏染色法有很多改进的形式,例如Silverton和Anderson( 1961), Bloows( 1991) 等。使用的试剂和时间取决于实验室内部常用菌株的特性,伹使用者的偏爱也对方法的 选择有影响;相对于侧重染色操作步骤是否有差异的方法来说，以下介绍的染色方法中 的试剂使用范围较宽，十分适用于通常的染色。然而，要获得满意的染色效果，要严格按 照方法的操作步骤进行，尤其在脱色阶段。 橾作步骤

(J)将经过18~24h培养的菌株，按常规的方式涂抹一个涂片，并加热固定；

(2) 用结晶紫染色2mm。注意染色液要覆盖到所有的涂抹范围（以下的操作步骤相同)；

(3) 拿住玻片使之成45度角，冲洗掉涂片上所有的结晶紫溶液，然后用碘溶液媒染1min;

(4) 倒掉碘溶液，吸干，拿住玻片成45度角，用95％的乙醇(或工业甲醇）冲洗玻片，直到不再有紫色溶液从玻片上流下为止(对于薄的涂片来说需要5~15s)；

(5) 用流水淋洗后用1%的沙黄溶液染色15s;

(6) 将玻片充分洗净吸干。

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