所存微生物都受到其生存环境中pH的影响通常，选择性物质的存在会缩小它们 生长的pH范围。有时，培养基的酸度或碱度也能作为一种生长选择因子。而对于生化 测试培养基，微生物在基质中显tk活性的pH的范围比生长所耑的PH范围窄：因此，将 培养基的PH调至预期的范围内是很蓽要的。当实验室根据培养基成分自己配制培养基 时，必须检测并调整pH必须指出的是，即使是生产厂商提供的现成的合成脱水培养基 (尤其是对一些库存的脱水培养基），在制成实验用培养基后也需要对其最终PH进行测定。 测定培养基pH的最准确的方法是使用pH计。使用前必须用已知pH的（通常PH 为4~7)标准缓冲溶液进行校准。将pH计的电极用蒸馏水冲洗后浸入到烧杯的培养基 中，就可以从pH汁的刻度读出培养基的pH。每个生产厂商对每种不同pH计都提供有 详细的操作说明。
配制培养基时，使用带机械搅拌的pH计可以很容易地调整pH
培养基应在能够不停搅拌的荇器(如大烧杯）中配制，最好使用磁力搅拌器，磁力搅拌器带有聚乙烯或聚四氟乙烯包装的磁棒。含琼脂的培养基需在融化后调整其pH，用可加 热的磁力搅拃器很容易办到。调节pH时用巳知pH的标准缓冲液溶液先对pH计迸行 校准。然后将复合电极和电阻温度计(如果有)置于培养基中，从烧杯远离电极的一端缓 慢加入适量的盐酸和氢氧化钠，直到培养基达到并保持所需的pH。
PH计的温度补偿应考虑到温度对电极系统的影响：在一些稀释液和培养基中，PH 随温度的变化而有相当大的变化。对于液体培养基和稀释液而言，pH通常既可以在25℃下,也可以在其使用时的温度下调整和测定。
琼脂培养基必须在溶解后进行PH的调整，溶解的温度在45℃以上：因此，固体培养 基应在其使用温度确定pH这时应使用平头的复合电极，同吋用手动校准PII计的温度 补偿。在制备培养基时，若测定出培养基在熔化状态和凝固状态的pH有所不同时，说明 在调整pH时产生误差。
同样,制备的培养基在加热灭菌处理(如高压灭菌)时，也可能会产生PH的变化。对 于脱水培养某，生产厂商己考虑到这一点，通常不需要再调整其pH。但应认真核对待用 培养基的pH如果脱水的琼脂培养基在再次溶解或制备的过程中必须调整pH，那么最 好在灭菌操作步骤之后用过滤灭菌的盐酸和氢氧化钠溶液进行调整，以避免造成因再次 灭菌而形成的培养基的过度加热。当用不同的原料或药品制备培养基时，必须在高压灭 菌后检测培养基的pH。此外，如果发现培养基的pH在每次高压灭菌后都发生相同变 化，可在配制培养基时对pH进行适当调整。但仍需测定培养基灭菌后的最终pH。
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