荧光显微镜种类与功能

荧光显微镜

荧光是由一定波长的光被特定物质吸收后，发射出 另一种具有较长波长的光而产生 的一种现象。这种能重新发射光的物质称为荧光团。一些天然的生物物质(如叶绿素）都 有荧光现象,被称为自发荧光。用于微生物显微镜观察的样品常用荧光染色物质(或称为 “荧光染料”)染色。使用特殊的波长转换装置，可以在荧光染料被紫外光照射吋,发出可 见光谱范围内的光。这类染料有吖啶橙、荧光素异硫氰酸盐和酸性品红等。荧光燃料被 激发后发射的光显示特殊的波峰值。吖啶橙是一种异染性染料,是单体荧光绿(波长约 525nm)和荧光红染料分子结合后的产物。这种产物遇到RNA时染料之 间发生交互作用产生红色荧光;但遇到DNA时，则染料之间的交互作用丧失，而产生绿 色荧光。

荧光显微镜的光源可以是卤素石英灯，高压汞蒸气灯或氙弧光灯。 可以将荧光与抗血淸结合进行免疫荧光染色来检测特殊的菌种。检测寄主组织中的 特异性病原菌时，就可以采用这种检测技术

发射紫外光的荧光显微镜

因为玻璃能吸收紫外线，所以这种显微镜的聚光镜系统要用石英制造。物镜和目镜可以用普通玻璃制造，因为它们只用于观察样品发出的可见光。但是需要在光路h安装 斜棱镜紫外滤光片以保护眼睛，还应在显微镜载物台前安装紫外滤光屏以防止紫外光 散射。

育接表面荧光显微镜

在表面荧光显微镜中，激发光直接通过R镜系统从上部照射到样品上,光路应该在聚 焦样品的同吋,也能使激发光聚焦。

这种显微镜操作方法与膜过滤结合有特殊的用途。直接表面荧光膜技术(DEFT)的 发展始于对末加工奶(Pettipher等，1980)和热处理奶的快 速细菌计数r这种方法的最卨灵敏度能达到10³〜10⁴个/g。

膜过滤检测方法已经成熟应用于液体或经过适当处理后能通过滤膜的样品。例如， 用解蛋白酶将牛奶中的牛体细胞分解，并用表面活性剂打碎牛奶中的腊肪小球，就可以使 用这种技术进行牛奶中细菌的检测。这种方法也可以用于检测其他种类的食品。

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