中文版  |   English  |   加入收藏  |   客服热线:400-0532-596
微生物技术资料
文章检索
  首页 > 微生物知识->微生物基本知识->诺如病毒检测原理与富集

诺如病毒检测原理与富集



录入时间:2014-3-7 11:12:36 来源:海博生物

诺如病毒(Norovirus,NV)是引起全世界所有年龄组人群急性胃肠炎暴发流行的重要病原之一。属杯状病毒科,诺如病毒属单股正链RNA病毒,其基因组长度为7 kb~7.5 kb,病毒直径约为26 nm~35 nm,无包膜,表面粗糙,球形,呈二十面体对称;电镜下缺乏显著的形态学特征,负染色电镜照片显示,NV是具有典型的羽状外缘,表面有凹痕的小圆状结构病毒。

方法原理

在甘氨酸缓冲液中通过物理研磨对分离出的样品均质以释放病毒,PEG8000沉降病毒。提取总RNA后,进行进一步纯化。利用普通RT-PCR和实时荧光RT-PCR进行检测,对可疑的PCR产物进行测序分析确定其基因型别。

病毒的富集

无菌取样,在5 g检样中加入35 mL甘氨酸缓冲液(样品重量与缓冲液体积之比为1:7);组织匀浆器中高速匀浆3 min,充分破碎混匀。

将所有均质液转移到50 mL离心管中,37 ℃孵育30 min或室温下振荡30min;4 ℃,10000×g离心30 min。

取上清,加入10ml氯仿或更多,充分振摇,放置10min,中间振摇一次,4 ℃,10000×g离心30 min。

取上清至另一干净的100 mL离心管中,加入等体积的PEG 8000溶液(PEG终浓度为8%),上下颠倒离心管以充分混匀。

7.2.5 冰上放置至少1 h,4℃,10000×g离心5 min。弃去上清,保留沉淀。

 

上一篇:培养基的质量要求

下一篇:大肠埃希氏菌分离与初步生化试验

相关文章:
诺如病毒pcr结果判定 诺如病毒试验结果判定
诺如病毒核酸检测 诺如病毒样品处理
诺如病毒ELISA检测方法标准操作 诺如病毒ELISA检测
首页 | 关于我们 | 网上商城 | 在线客服 | 联系我们
业务联系电话
   400-0532-596 0532-66087773
   0532-66087762 0532-81935169
邮箱:qdhbywg@vip.126.com
地址:青岛市城阳区锦汇路1号A2栋
产品技术咨询
  工作日(周一至周六8:00-18:00):
  18562658263 13176865511
  其它时段:13105190021
投诉与建议:13105190021 13006536294