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大肠菌群平板计数法检验



录入时间:2014-3-18 11:34:51 来源:海博生物

平板计数

选取2个~3个适宜的连续稀释度,每个稀释度接种2个无菌平皿,每皿1 mL。同时,分别吸取1 mL空白稀释液加入两个无菌平皿内作空白对照。

及时将15 mL~20 mL冷至46 ℃的结晶紫中性红胆盐琼脂(VRBA)倾注于每个平皿中。小心旋转平皿,将培养基与样液充分混匀,待琼脂凝固后,再加3mL~4 mLVRBA覆盖平板表层。翻转平板,置于36 ℃±1 ℃培养18 h~24 h。

平板菌落数的选择

检样

25 g(mL)样品+225 mL 稀释液,均质10 倍系列稀释选择2 个~3 个适宜稀释度的样品匀液,接种VRBA 平板选取菌落数在15 CFU~150 CFU之间的平板,分别计数平板上出现的典型和可疑大肠菌群菌落。典型菌落为紫红色,菌落周围有红色的胆盐沉淀环,菌落直径为0.5 mm或更大。

证实试验

从VRBA平板上挑取10个不同类型的典型和可疑菌落,分别移种于BGLB肉汤管内,36 ℃±1 ℃培养24 h~48 h,观察产气情况。凡BGLB肉汤管产气,即可报告为大肠菌群阳性。

大肠菌群平板计数的报告

经最后证实为大肠菌群阳性的试管比例乘以9.3中计数的平板菌落数,再乘以稀释倍数,即为每g(mL)样品中大肠菌群数。例:10-4样品稀释液1 mL,在VRBA平板上有100个典型和可疑菌落,挑取其中10个接种BGLB肉汤管,证实有6个阳性管,则该样品的大肠菌群数为:100×6/10×104/g(mL)=6.0×105 CFU/g(mL)。

 

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