诺如病毒样品处理

录入时间:2014-3-20 11:16:36 来源：海博生物

样品的运输与保存

储存和运输过程中保持样品温度在0 ℃～5 ℃。实验室接到样品后应尽快进行检测。如果暂时不能检测应将样品保存于-80℃冰箱中。

病毒的富集

无菌取样，在5 g检样中加入35 mL甘氨酸缓冲液（样品重量与缓冲液体积之比为1:7）；组织匀浆器中高速匀浆3 min，充分破碎混匀。

将所有均质液转移到50 mL离心管中，37 ℃孵育30 min或室温下振荡30min；4 ℃，10000×g离心30 min。

取上清，加入10ml氯仿或更多，充分振摇，放置10min，中间振摇一次，4 ℃，10000×g离心30 min。

取上清至另一干净的100 mL离心管中，加入等体积的PEG 8000溶液（PEG终浓度为8%），上下颠倒离心管以充分混匀。

冰上放置至少1 h，4℃，10000×g离心5 min。弃去上清，保留沉淀。

病毒RNA的提取和纯化使用商品化的病毒RNA 提取试剂盒进行RNA 的提取和纯化，操作步骤请参考产品说明书。

为防止RNA 降解，所用实验用具及溶液应无RNA 酶，操作过程中应自始自终佩戴一次性橡胶或乳胶手套，并经常更换。