采样应在无菌操作下进行。将蘸有无菌生理盐水的无菌棉拭子在推子前部上下均匀各涂抹3次，或在使用的刀刃、剪刃的两侧各涂抹一次采样。将采样后的棉拭子剪去手接触部分，放入10mL灭菌生理盐水中，充分振摇，取5mL放入双料乳糖胆盐发酵管中，置36℃±1℃温箱中培养24h，如乳糖胆盐发酵管中不产气，则可报告大肠菌群阴性，如有产酸、产气者，则进行分离培养。
分离培养：将产酸、产气的发酵管划线接种在伊红美蓝琼脂平板上，置37℃温箱培养18~24h，观察菌落形态，做革兰染色和证实试验。典型的大肠菌落为黑紫色或红紫色，具有金属光泽。
证实试验：挑取可以大肠杆菌菌落1~2个进行革兰染色镜检，同时接种乳糖发酵管于36℃±1℃培养24h，观察产气情况。
结果报告
如乳糖管最终产酸、产气、革兰染色为阴性无芽孢杆菌，即可报告大肠菌群阳性
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